温州市科技计划项目(Y20100106)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：马泳泳周淑娟俞康葛杭萍蔡芳芳更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院中南大学温州医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 姜黄素对骨髓瘤细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制研究被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨姜黄素对骨髓瘤细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法:shRNA表达质粒沉默含IQ模序的RasGTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)后转染RPMI8226细胞,Western blotting法检测RPMI8226-shIQGAP1组、RPMI8226-shRNA阴性对照组和未转染RPMI8226组细胞IQGAP1表达;不同浓度姜黄素作用于各组细胞后,Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验检测细胞的迁移及侵袭力,RTPCR法检测姜黄素作用后IQGAP1 mRNA的表达,Western blotting检测姜黄素对各组细胞IQGAP1蛋白表达的影响。结果:使用shRNA表达质粒沉默IQGAP1后,RPMI8226细胞IQGAP1表达减少;RPMI8226-shIQGAP1组较RPMI8226-shRNA阴性对照组和未转染RPMI8226组细胞迁移及侵袭力下降,姜黄素可降低RPMI8226-shRNA阴性对照组和未转染RPMI8226组细胞迁移及侵袭力,无浓度相关性,不同浓度的姜黄素对RPMI8226-shIQGAP1组作用后细胞的迁移及侵袭力无明显变化。对于RPMI8226-shRNA阴性对照组及未转染RPMI8226组,姜黄素作用后IQGAP1 mRNA及蛋白的表达下降。结论:姜黄素通过抑制IQGAP1的表达降低骨髓瘤细胞的迁移力和侵袭力。
- 马泳泳黄进周淑娟葛杭萍俞康
- 关键词：姜黄素肿瘤侵袭
- IQGAP1在人骨髓瘤细胞中过表达且与ERK相互作用被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)在骨髓瘤细胞中的过表达及其机制。方法:RT-PCR和Western blotting检测RPMI8226和U266细胞IQGAP1表达;使用不同的寡核苷酸序列构建沉默人IQGAP1的shRNA质粒(clone 1、clone 2、clone 3和clone 4)、转染RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blotting检测其IQGAP1表达;Western blotting检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)、RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、Akt、p-AKT、STAT3和p-STAT3水平,免疫共沉淀确定IQGAP1和ERK的关系。结果:IQGAP1在RPMI8226和U266骨髓瘤细胞株中过表达,使用shRNA表达质粒沉默RPMI8226细胞IQGAP1后,IQGAP1表达减少,在有或无血管内皮生长因子(VEGF)/白细胞介素6(IL-6)作用下检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)细胞增殖明显下降。进一步检测3组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、AKT、p-AKT、STAT3和p-STAT3蛋白水平,与RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组相比,RPMI8226-shIQGAP1组ERK1/2磷酸化水平下降70.2%,免疫共沉淀法明确在RPMI8226细胞中IQGAP1和ERK存在相互作用。结论:IQGAP1在骨髓瘤细胞中的过表达可能与MAPK途径的ERK相互作用有关。
- 马泳泳黄进周淑娟葛杭萍俞康
- 丙戊酸钠对RPMI822和U266细胞增殖及IL-6/JAK/STAT信号通路的影响被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)对人骨髓瘤RPMI8226和U266细胞增殖及IL-6/JAK/STAT信号通路的作用。方法:RPMI8226和U266细胞经不同浓度VPA处理12及24 h后进行实验,MTT法检测VPA对细胞增殖的影响,流式细胞术检测VPA处理后的细胞周期及凋亡率,ELISA法检测培养细胞上清IL-6的浓度,半定量RT-PCR检测VPA作用后RPMI8226和U266细胞中STAT3、STAT5、Bcl-xL、Mcl-1、c-Myc、CCND1和VEGF mRNA表达水平。Western blotting检测JAK2和STAT5总蛋白及磷酸化蛋白表达水平。结果:(1)10、20及40μmol/L VPA处理RPMI8226和U266细胞12 h及24 h后,细胞存活率值显著下降,与各对照组比较均有显著差异(P<0.05),各对照组之间无显著差异。(2)VPA处理RPMI8226和U266细胞24 h后,G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,细胞凋亡率增加,且凋亡率与VPA的作用剂量相关。(3)VPA处理RPMI8226和U266细胞24 h后,上清IL-6浓度与VPA浓度呈负相关。(4)RPMI8226和U266细胞组在40μmol/L VPA处理后其STAT3、STAT5、Bcl-xL、Mcl-1、c-Myc、CCND1和VEGF mRNA表达减低,与未处理组比较有显著差异。(5)与对照组比较,VPA处理组p-JAK2、JAK2、p-STAT5和STAT5蛋白表达均显著降低。结论:(1)VPA对多发性骨髓瘤细胞有体外抑制作用;(2)VPA对骨髓瘤细胞株的体外抑制可能是通过调节IL-6/JAK/STAT信号通路来实现的。
- 马泳泳周淑娟葛杭萍蔡芳芳章瑜俞康
- 关键词：丙戊酸钠白细胞介素6JAK
- 地西他滨联合丙戊酸钠诱导的骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究被引量：6
- 2013年
- 目的探讨地西他滨(DCA)联合丙戊酸钠(VPA)体外诱导骨髓瘤细胞株RPMI 8226凋亡及对死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因去甲基化的作用。方法体外培养多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞,实验分为5组:DCA组(选取1.5、3μmol/L 2个浓度),VPA组(选取1、2μmol/L 2个浓度),DCA+VPA组(DCA 3μmol/L+VPA 2μmol/L),PBS组,阴性对照组。上述细胞分别培养24、72h后,MTT法检测细胞存活情况。培养72h后,透射电镜观察DCA+VPA组细胞凋亡形态;流式细胞仪Annexin V法检测上述5组细胞凋亡率;MSP法检测上述5组细胞(DCA组取3μmol/L浓度,VPA组取2μmol/L浓度)处理前后DAPK基因甲基化状态,半定量RT-PCR方法检测DAPK基因表达情况。结果处理72h后,DCA+VPA组MTT值下降最明显,细胞存活率降低,与PBS组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);VPA组及DCA组MTT值均下降,DCA 3μmol/L组与PBS组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。处理72h后,DCA+VPA、VPA、DCA组G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,细胞凋亡率增加,DCA+VPA组凋亡率高于DCA组及VPA组(P<0.05),与PBS组及阴性对照组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。透射电镜下可观察到DCA+VPA组细胞出现核染色质凝聚、固缩、边集、核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变。处理72h后,DCA+VPA、VPA、DCA组细胞DAPK启动子均有去甲基化表现,以DCA+VPA组去甲基化程度为最大,与PBS组及阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。DCA+VPA、VPA、DCA组DAPK基因mRNA表达量均增加,且DCA+VPA组的相对mRNA比值高于其余4组(P<0.05)。结论DCA联合VPA可诱导骨髓瘤细胞株RPMI 8226凋亡及DAPK基因启动子去甲基化,使DAPK基因表达恢复。
- 马泳泳周淑娟陈枫煜蔡芳芳俞康
- 关键词：糖尿病C反应蛋白
- 丙戊酸钠对骨髓瘤细胞DAP-K基因去甲基化及迁移、侵袭力影响的实验研究
- 2013年
- 目的本研究探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)体外对骨髓瘤RPMI 8226细胞株死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAP-K)基因去甲基化的作用及对其迁移、侵袭力的影响。方法丙戊酸钠组(1、2、4μmol/L)、PBS组、阴性对照组作用RPMI 8226细胞株24、72h后进行试验,MSP法检测各组骨髓瘤细胞处理前后DAP-K基因甲基化状态,半定量RT-PCR方法检测DAP-K基因表达,transwell迁移及matrigel侵袭试验分别检测丙戊酸钠对RPMI 8226细胞迁移及侵袭能力的影响,并对VPA处理后细胞DAP-K基因表达情况及其迁移及侵袭能力行相关性分析。结果①丙戊酸钠组2、4μmol/L在VPA作用72h后RPMI 8226细胞其DAP-K启动子有去甲基化表现;②丙戊酸钠组2、4μmol/L在VPA作用72h后DAP-K基因mRNA表达量增加;③2、4μmol/L丙戊酸钠处理后RPMI 8226细胞迁移能力及侵袭力较PBS组及阴性对照组降低,有统计学差异(P<0.05);④VPA处理后RPMI 8226细胞DAP-K基因表达情况及其迁移及侵袭能力呈负相关。结论丙戊酸钠可诱导骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞DAP-K基因启动子去甲基化,使DAP-K基因重新表达,并使迁移能力及侵袭力下降;VPA处理后RPMI 8226细胞DAP-K基因表达情况与其迁移与侵袭能力呈负相关。
- 马泳泳陈枫煜
- 关键词：丙戊酸钠死亡相关蛋白激酶
