国家自然科学基金(81170559)
- 作品数：8 被引量：12H指数：1
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- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院东南大学更多>>
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- 钙视网膜蛋白的结构与功能被引量：1
- 2013年
- 钙视网膜蛋白(Calretinin)是钙结合蛋白(CaBP)家族成员,是神经细胞内重要的活性物质,对细胞质内Ca2+浓度具有缓冲作用。Ca2+是细胞内重要的第二信使,在细胞内激活许多具有生理功能的酶或蛋白质,如依赖于Ca2+的蛋白激酶C和钙结合蛋白,参与多种代谢、骨骼肌/心肌收缩、神经反应冲动传导。Calretinin优势表达于中枢神经组织,此外还表达在睾丸(主要在Leydig细胞)、卵巢、肾上腺等合成类固醇的器官。Calretinin表达于不同的部位,其功能亦有异同,在细胞质调节激素合成,在细胞核内对细胞分化、发育、增殖、凋亡等也有调节作用。因此,Calretinin在生殖内分泌领域的作用逐步受到重视。
- 代晓南刘珊崔毓桂
- 关键词：神经元莱迪希细胞卵巢钙视网膜蛋白
- 人羊膜间充质干细胞改善高龄小鼠睾丸功能的实验研究被引量：1
- 2021年
- 目的:探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)改善高龄雄性小鼠睾丸功能的作用。方法:以36周龄雄性小鼠为高龄模型组,10周龄小鼠为年轻对照组。31只高龄模型组小鼠随机分为5组,分别为生理盐水对照组、1%人血清白蛋白对照组和治疗组,其中生理盐水对照组3只,其余各组每组7只。治疗组小鼠尾静脉注射hAMSC,剂量分别为3.4×10^(6)细胞/kg(低剂量组)、6.7×10^(6)细胞/kg(中剂量组)、1.4×10^(7)细胞/kg(高剂量组)。每周注射1次,治疗4次后小鼠继续饲养,5周后取血检测小鼠血清睾酮水平;行附睾内精子的分析;免疫荧光检测睾丸组织内STEM121和CD105的表达和定位,观察睾丸组织病理学改变,检测类固醇激素生成急性调节蛋白(StAR)、17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)的表达水平。结果:与年轻雄鼠比较,治疗前高龄雄鼠体质量增加、睾丸体质比下降、睾周脂肪质量增加(均P<0.01),血清睾酮水平下降(P<0.05),精子活动率降低、正常形态精子率下降(均P<0.05)。治疗前高龄雄鼠的精子计数、睾丸组织StAR和17β-HSD蛋白表达水平与年轻雄鼠比较差异无统计学意义(均P>0.05)。hAMSC治疗后,睾丸间质区可见STEM121和CD105表达的细胞;高剂量组血清睾酮水平升高(P<0.05);睾丸组织StAR蛋白表达无显著差异(P>0.05),但高剂量组17β-HSD蛋白表达上调(P<0.05)。中剂量组和高剂量组睾丸组织的生精小管细胞层数较人血清白蛋白对照组增多(P<0.05)。结论:初步实验结果表明,hAMSC对睾丸衰老具有保护作用,并促进雄激素合成。
- 张月鑫刘菡文施陈楠宁松周静李楚玉杨晓玉覃莲菊刘嘉茵胡艳秋崔毓桂
- 关键词：衰老间质干细胞移植人羊膜间充质干细胞生精功能睾酮合成
- SET蛋白对精母细胞株(GC-2 spd)增殖和组蛋白乙酰化的影响
- 2017年
- 目的:观察SET蛋白对GC-2 spd精母细胞株增殖和组蛋白乙酰化的影响,探讨SET蛋白调节精子形成的作用。方法:体外培养GC-2 spd细胞,通过精母细胞标志物乳酸脱氢酶C(LDHC)和睾丸特异激酶1(TESK1)鉴定。琼脂糖珠免疫共沉淀试剂盒检测SET蛋白与组蛋白H4的结合。分别转染空载腺病毒(Ad H1-si RNA/NS,对照组)和SET干涉腺病毒(Ad H1-si RNA/SET,干涉组),比较细胞增殖情况,荧光显微镜观察GC-2spd细胞中SET蛋白的表达;用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real time RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测m RNA以及蛋白的表达。结果:免疫荧光显示精母细胞株GC-2 spd阳性表达LDHC和TESK1;SET蛋白表达于GC-2细胞的胞核和胞质中,免疫共沉淀提示SET蛋白与组蛋白H4结合。转染SET干涉腺病毒后,核内和胞质中SET蛋白表达明显降低(P<0.01)。与对照组相比,干涉组细胞增殖明显降低,组蛋白H4乙酰化水平明显增高(P<0.05);但组蛋白乙酰化酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)m RNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:精母细胞核内和胞浆中均表达SET蛋白;SET蛋白降调,则抑制GC-2spd细胞增殖。SET蛋白可能通过与组蛋白H4相互作用调节其乙酰化,参与调节精子形成。
- 张蓓朱倩许波群徐文丹杨晓玉高超高莉刘嘉茵崔毓桂
- 关键词：精子发生精母细胞组蛋白类组蛋白乙酰化
- TRPV2对膀胱肿瘤细胞生物学影响的实验研究
- 2014年
- 目的探讨TRPV2离子通道对膀胱肿瘤细胞株5637和EJ细胞增殖及迁移侵袭的影响。方法将人膀胱癌EJ细胞株分为空白组、对照组和sh-RNA干扰组;5637细胞株分为空白组,对照组和TRPV2转染组进行实验。经细胞筛选出单克隆阳性细胞后,采用Western blot检测TRPV2蛋白表达的变化,鉴定基因的转染效率。流式细胞仪检测细胞生长周期,MTT法检测细胞生长曲线,划痕法检测细胞迁移侵袭能力,Transwell法检测细胞的浸润能力。结果 Western blot结果显示EJ细胞干扰组的TRPV2蛋白表达量明显低于空白组与对照组;EJ细胞干扰组G1期细胞比例,显著高于空白组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MTT法检测绘制细胞周期结果,3组细胞数目在第3天开始出现差异,干扰组的细胞数目显著低于空白组和对照组的细胞数(P<0.05),空白组与对照组细胞相比细胞周期无显著差异;划痕实验检测发现,干扰EJ细胞中的TRPV2表达后可以抑制EJ细胞的迁移;Transwell细胞浸润实验,说明干扰EJ细胞中TRPV2的表达后可以抑制肿瘤细胞的局部浸润作用。Western blot结果显示,干扰组5637细胞的TRPV2蛋白表达水平明显高于空白组和对照组;但3组细胞G1期细胞比例的差异无统计学意义;MTT法检测绘制细胞周期结果,3组细胞的生长曲线无明显差异;划痕实验检测发现5637细胞中TRPV2的表达量上升后可以明显加强5637细胞的迁移作用;Transwell浸润实验说明经过导入外源性的TRPV2使5637细胞中TRPV2的表达量上升后可以明显加强5637细胞的对于局部组织的浸润作用。结论 TRPV2可能是治疗膀胱肿瘤的关键靶点。
- 庄琰崔毓桂
- 关键词：膀胱肿瘤增殖
- 双酚A的生殖毒性研究进展
- 2012年
- 双酚A(Bisphenol A,BPA)作为一种重要的工业原料,广泛存在于塑料制品中。人类通过多种途径接触吸收、并在体内蓄积BPA,职业接触人群和日常生活接触人群的体内BPA水平差别较大,但即使低于安全摄入剂量[50μg(/kg.d)],母体在围生期接触BPA后也会对胚胎发育有影响,成人长时间接触BPA对其生殖系统的健康也会产生作用;影响的程度及范围会随着摄入剂量的增加而增大。因此,提前预防过早过多接触BPA类物质是非常必要的。从BPA的接触途径介绍分析BPA对人体的胚胎期、婴儿期及成年期生殖系统发育的影响,以及不同剂量浓度下产生的影响变化情况,为以后预防和研究方向奠定基础。
- 罗建黄博贤崔毓桂
- 关键词：胚胎发育泌尿生殖系统性腺障碍双酚A
- 普拉梭菌上清对葡聚糖酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠Th17细胞及IL-17A的影响被引量：8
- 2015年
- 目的:探讨普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii,Fp)上清对葡聚糖酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的预防和治疗作用及机制。方法:40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组、预防组,每组10只。观察各组小鼠的结肠组织病理学评分,计算脾Th 17细胞占单核细胞比例;检测外周血浆白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)和IL-6水平,以及结肠黏膜组织转录因子维甲酸相关孤儿核受体-γt(transcription factor retinoic acid-related orphan receptor-γt,ROR-γt),IL-17A和IL-6的m RNA表达情况。结果:治疗组和预防组小鼠结肠组织病理损伤较模型组轻,其病理组织学评分较模型组均明显下降(均P<0.05),预防组和治疗组之间差异无统计学意义(P>0.05);治疗组和预防组脾辅助性T细胞(helper T cell,Th17)比例较模型组均明显下降(均P<0.01);治疗组血浆IL-17A和IL-6水平也较模型组均明显降低(均P<0.05),结肠组织ROR-γt,IL-17A和IL-6的m RNA表达均明显低于模型组(均P<0.05),但预防组血浆IL-6水平和结肠组织IL-6 m RNA表达与模型组差异无明显统计学意义(均P>0.05)。结论:Fp上清可预防和治疗DSS所致的小鼠结肠炎,其机制可能为抑制脾和肠道Th 17细胞的生成,减少外周血和结肠组织炎性细胞因子IL-17A分泌;Fp上清可通过降低IL-6水平来治疗结肠炎。
- 黄晓丽张新费先艳陈兆桂于成功
- 关键词：溃疡性结肠炎TH
- 小鼠Calb_2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:为了体外研究Calretinin(Calb2)基因在生殖系统、神经系统、视觉传导中的作用,构建小鼠Calb2基因表达重组腺病毒载体。方法:用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,以小鼠Calb2cDNA为模板,扩增Calb2基因。亚克隆后,将Calb2基因片段克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdTrack-Calb2。将穿梭质粒pAdtrack-Calb2转化至BJ-5183感受态细菌中,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,获得重组质粒AdCMV-Calb2。重组质粒AdCMV-Calb2转染AD-293细胞,进行病毒包装和扩增,通过绿色荧光蛋白(GFP)报告基因观察重组病毒的产生。同时,构建对照腺病毒载体AdCMV-GFP。用获得的重组腺病毒感染AD-293细胞,通过观察GFP检测感染效率、蛋白质印迹方法检测Calb2基因的表达。结果:测序和酶切鉴定重组腺病毒质粒构建正确;经AD-293细胞包装后可观察到GFP表达;获得的重组腺病毒载体体外感染AD-293细胞,观察到GFP表达;经蛋白质印迹方法检测,与未感染腺病毒载体组(Mock)和感染对照腺病毒载体组(AdCMV)相比,Calb2基因腺病毒载体(AdCMV-Calb2)感染组CALB2蛋白水平显著增高(P<0.05)。结论:成功构建了小鼠Calb2基因重组腺病毒载体,并在AD-293细胞超表达,为课题组研究Calb2基因在生殖相关疾病的生理与病理生理作用奠定了基础。
- 王菁罗建刘珊代晓南高莉高超刘嘉茵崔毓桂
- 关键词：腺病毒科泌尿生殖系统
- 无机纳米颗粒作为非病毒基因载体的研究被引量：1
- 2012年
- 理想的基因载体应具有无毒、高效、靶向性好、容易制备、价格低廉等优点,目前常用的基因载体分为病毒载体和非病毒载体两类。一种新型的非病毒载体——无机纳米载体有望发展成理想的基因载体。无机纳米颗粒作为基因载体能包裹、浓缩、保护核酸避免核酸酶的降解,并可介导目的基因在靶细胞内表达,几乎无毒性,制备简易,保存方便,表面积大,具有良好的生物相容性和可降解性,稳定性好。对有关无机纳米颗粒作为基因载体的研究进行分类、归纳与整理,发现无机纳米颗粒作为基因载体具有广阔的应用前景。在开展生殖相关的研究中,正尝试采用该技术向多种细胞内导入如Calretinin基因和SiRNA的多个基因片段。
- 刘珊刘嘉茵崔毓桂
- 关键词：基因疗法
