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头孢菌素C高产菌株的推理选育被引量：10: 2011年; 目的优化推理选育条件,获得头孢菌素C高产菌株。方法根据头孢菌素C的生物合成途径和代谢调控机制设计菌种推理选育方案,原始出发菌株经紫外诱变后,采用托盘琼脂柱筛选法依次对铜离子、丙二酸及头孢菌素C耐受菌株进行选育。结果最终获得一株头孢菌素C高产菌株TBC-68071,其产量较原始菌株提高了154.6%,且高产特性稳定。结论对铜离子、丙二酸及头孢菌素C耐受的顶头孢霉菌株可以高产头孢菌素C,推理选育克服了随机筛选的盲目性,提高了菌种筛选的效率。; 孟国庆赵林戴秀君李越中李世旭刘新利; 关键词：头孢菌素C 推理选育顶头孢霉铜离子丙二酸

一种用于构建红色红曲霉基因组cosmid文库的大片段DNA制备方法被引量：4: 2009年; 【目的】制备用于构建红色红曲霉cosmid文库的大片段基因组DNA。【方法】采用优化的酚氯仿抽提法制备DNA,并利用Sau3AI切割至平均大小为40 kb,然后使用Stratagene包装蛋白构建cosmid文库。基于PCR法使用同源探针从该文库中进行了目的基因的筛选。【结果】制备了浓度为5μg/μL,平均片段大小大于48 kb的红色红曲霉大片段基因组DNA。利用该DNA构建的cosmid文库基因组覆盖倍数为10,并筛选到了含有目的片段的cosmid。【结论】通过该方法制备红色红曲霉大片段基因组DNA简便易行并且完全可以用于构建cosmid文库。; 安洋杨晶徐欣欣刘钢

青霉素酶在青霉素菌渣无害化处理中的应用被引量：6: 2009年; 建立一种快速、有效的方法降解青霉素菌渣中青霉素残留。采用高效液相色谱(HPLC)方法检测湿菌渣,得到其平均青霉素效价残留为2 179 U/g,即相对质量分数为1.3 mg/g;将青霉素酶以相对于残留青霉素效价比为3∶1的比例量混入菌渣中,37℃,1 h后可以将残留青霉素完全降解,实现了菌渣的无害化处理,为青霉素菌渣的资源化利用奠定了基础。; 刘慧娟王丽丽邓凯顺仪宏; 关键词：青霉素酶

抗生素生产菌株的推理选育研究进展被引量：5: 2011年; 推理选育是应用广泛的一种高通量筛选技术。本文综述了以底物、前体物质、碳源分解代谢物、产物和无机盐等因素为线索开展的抗生素高产菌株推理选育的研究进展,阐明了对随机诱变突变株进行定向筛选是调节菌体自身代谢调控系统、进而改良菌种特性的有效方法。; 陆震戴秀君孟国庆赵林刘新利; 关键词：推理选育菌种改良抗生素

青霉素高产菌株高通量检测和筛选方法的研究被引量：1: 2011年; 目的建立高通量筛选青霉素高产菌株的方法。方法采用青霉素酶水解青霉素形成青霉噻唑酸,产物与碘液反应,以淀粉为指示剂,青霉素含量与碘液用量呈现良好的线性关系。结果在室温条件下,不超过10min,可并行检测多个发酵液样品的青霉素含量,该方法简便、迅速、微量并且不受发酵液中其他杂质成分的干扰,也可在10min内对超过200个发酵液样品中的青霉素含量进行相对评估,淘汰90%以上的低效价菌株。结论提供了高通量筛选青霉素高产菌株的方法。; 王丽丽张春晓刘晓红陈晓波; 关键词：青霉素青霉素酶高通量筛选

Genome shuffling育种技术应用研究进展被引量：4: 2010年; 本文综述了一种高效育种技术Genome shuffling(基因组重组)技术及其在细菌、真菌及放线菌的菌种选育方面的应用研究进展。与传统育种技术相比,Genome shuffling技术是一种全基因组重排的高效定向育种技术。菌株经过多轮递归原生质体融合,使正向突变的不同基因重组到同一个融合子中,大幅提高菌种的正突变性,打破在菌种改良过程中的诸多局限性,在现代菌种选育中得以广泛应用。; 孟国庆陆震赵林刘新利; 关键词：GENOME 菌种选育原生质体融合高通量筛选

大肠杆菌甘露糖异构酶(MI)基因克隆及功能研究被引量：1: 2010年; 甘露糖异构酶(EC5.3.1.7,Mannose isomerase,简称MI)能够催化果糖和甘露糖之间的异构转化。甘露糖加氢催化形成甘露醇,因此甘露糖异构酶的研究为工业生产甘露糖和甘露醇提供了新的可能途径。本研究以Escherichia coliJM109基因组DNA为模板,PCR扩增mi基因。结果表明,所克隆的mi基因与E.colistr.K-12substr.MG1655的MI基因序列一致性为99.9%,氨基酸序列一致性为99%。该基因能够在E.coliBL21(DE3)中进行高效诱导表达,诱导出51.4kD的特异性融合蛋白。酶学研究表明,该酶最适反应温度为37℃,最适pH为7.5,甘露糖为最佳反应底物,反应平衡时果糖与甘露糖的比值约为2.7。; 高小倩张春晓陈晓波王丽丽仪宏; 关键词：克隆原核表达酶活

灰黄青霉Pa-pex11基因对青霉素产生的影响被引量：1: 2009年; 【目的】研究灰黄青霉Pa-pex11对青霉素产生的影响。【方法】通过保守序列设计引物从灰黄青霉中克隆了含有pex11同源基因DNA片段,进而通过热不对称交错PCR(Thermal asymmetric interlacedPCR,TailPCR)扩增得到灰黄青霉中Pa-pex11基因的全序列。利用根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)系统,在灰黄青霉基因组上导入额外的Pa-pex11基因。对灰黄青霉野生型菌株和转化子进行了青霉素发酵及生物活性测定。通过荧光定量PCR(quantitative PCR)对转化子中的Pa-pex11拷贝数进行了相对定量。同时通过透射电镜观察了菌体中微体数量的变化。【结果】实现了灰黄青霉根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了在灰黄青霉基因组上插入额外Pa-pex11基因的转化子,在转化子中青霉素产量较野生型菌株提高了1.7倍,电镜照片显示转化子中微体数量明显增加。【结论】通过在基因组中增加Pa-pex11拷贝数能有效地增加灰黄青霉微体的数量,进而提高青霉素的产量。; 杨晶安洋徐欣欣刘钢; 关键词：青霉素微体

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