国家自然科学基金(30070702)
- 作品数：24 被引量：176H指数：9
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- 相关机构：深圳大学海口市人民医院深圳市第一人民医院更多>>
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- 荔枝果实中泛变应原profilin基因的克隆及序列分析被引量：10
- 2006年
- 目的克隆荔枝果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)同源基因。方法采用生物信息学方法对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过RT-PCR和3'-RACE技术克隆荔枝果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。结果获得了一个全长的新基因(689bp)。该基因开放阅读框为396个碱基,编码131个氨基酸残基,经分析该蛋白等电点为4.98,分子量约为14060。此序列已被GenBank收录,登陆号为DQ309464。序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(与桦树和橡胶花粉泛变应原profilin的同源性分别为80%和84%,与桃子profilin的同源性为85%),因此认定其为泛变应原基因。结论从荔枝果实中成功地克隆出了一个泛变应原基因,为进一步的蛋白表达奠定了基础。
- 张红云宋娟娟刘志刚康敏雄
- 关键词：荔枝PROFILIN基因克隆
- 王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白（profilin）。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因，并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物，采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框，将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达，通过Ni2^＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，采用Western blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因，由675个碱基组成，开放阅读框为396个碱基（包括终止密码子），编码131个氨基酸。经分析，这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白，等电点为4．86，相对分子质量（Mr）约为14．2×10^3。此序列已被GenBank收录，登录号为EF173599。重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达，进一步经Ni^2＋亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功克隆和表达了王棕花粉profilin，为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。
- 姚敏孟光刘志刚邬玉兰张红云
- 关键词：基因表达纯化
- 软叶针葵花粉肌动蛋白抑制蛋白基因的克隆表达与纯化及免疫学鉴定被引量：4
- 2008年
- 花粉是最主要的吸入性过敏原之一。软叶针葵是一种热带、亚热带常见植物，在授粉季节所产花粉量较大，具很大的过敏潜能。但目前国内外尚鲜见软叶针葵花粉过敏原研究的报道。本研究用简并性引物从软叶针葵花粉中获得1个肌动蛋白抑制蛋白（profilin）基因，并在大肠杆菌中进行表达，获得有活性的重组profilin，同时研究其免疫学特性，并为软叶针葵花粉过敏诊断及免疫学治疗奠定基础。
- 孟光姚敏刘志刚邬玉兰
- 关键词：蛋白基因肌动蛋白免疫学鉴定克隆表达蛋白抑制吸入性过敏原
- 艾蒿、青蒿花粉变应原组分的研究被引量：27
- 2004年
- 目的 对艾蒿、青蒿花粉变应原进行分离、鉴定。方法 采用不同的提取方式得到艾蒿、青蒿花粉的粗浸液 ,通过饱和 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分离蛋白质组分 ,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量 (Mr) ;采用Western blotting鉴定 2种花粉的主要及次要变应原。结果 艾蒿、青蒿花粉分别分离到二十和十多种蛋白质组分。其中艾蒿花粉的组分中有 9种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合 ,Mr 为 6 2 0 0 0、4 30 0 0、380 0 0的蛋白条带的结合率最高。青蒿花粉的组分中有 11种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合 ,Mr 为 4 30 0 0、380 0 0的蛋白条带结合率最高。结论 艾蒿花粉的主要变应原Mr 分别为 6 2 0 0 0、4 30 0 0和 380 0 0 ,青蒿花粉的主要变应原Mr 分别为 4 30 0 0和 380 0 0 ;2种花粉变应原组分存在很大相似性 。
- 杨慧刘志刚韩庆国侯穗波梁桂珍
- 关键词：SDS-PAGE
- 椰子花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆并表达椰子花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(Profilin)。方法:利用RT-PCR结合RACE技术克隆椰子花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个椰子花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。结果:克隆获得了椰子花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。经分析,这个序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.61,分子量约为14 kD。此序列已被GeneBank收录,登陆号为EF173598。重组椰子花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达和纯化后,经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论:成功地克隆和表达了椰子花粉profilin,为该花粉profilin用于椰子花粉过敏诊断和免疫治疗提供了理论依据。
- 孟光姚敏刘志刚邬玉兰张红云
- 关键词：PROFILIN基因表达纯化
- 重阳木花粉相关变应原profilin基因的克隆、表达及免疫学鉴定被引量：2
- 2008年
- 克隆、表达和纯化重阳木花粉相关变应原profilin基因,并对其免疫学活性进行鉴定。采用RT-PCR和3-’RACE技术获得整个profilin基因的开放阅读框,将其与PET28a载体连接并转化大肠杆菌E.cdiBL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。克隆获得了profilin的全长基因,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。成功地构建了原核表达载体,并在大肠杆菌中大量地表达了profi-lin,纯化后的重组蛋白进行免疫印迹,结果显示重阳木花粉过敏患者血清对重组profilin反应呈阳性。
- 姚敏刘志刚邬玉兰孟光李春林
- 关键词：重阳木
- 木麻黄花粉泛变应原profilin基因的克隆、表达及免疫学活性鉴定
- 2009年
- 变态反应性疾病被世界卫生组织（WHO）认为是当前世界性的重大卫生学问题。在引起变态反应性疾病的致病因素中气传致敏花粉（风媒花粉）是导致季节性变态反应疾病的最重要因素之一。目前，大约40％的过敏反应症状是由于接触特定花粉产生，世界范围内花粉症发病总数估计有5000万人以上。
- 孟光姚敏刘志刚宋娟娟李春林
- 关键词：活性鉴定变态反应性疾病N基因免疫学
- 深圳市秋季气传致敏花粉的调查被引量：5
- 2011年
- 应用Burkard采样器对深圳市气传花粉浓度进行监测,并对花粉浓度进行统计分析.探讨深圳市秋季气传花粉的种类、数量及季节消长规律,为本地区防治花粉症提供有效资料.本次调查共曝片244张,1.5 m和30 m 2个高度采集点各122张.曝片共识别花粉39种,12 850粒,其中1.5 m高度7881粒,占总数的61.3%;30 m高度4 969粒,占总数的38.7%,曝片所见以草本花粉为主,禾本科、菊科花粉最多.调查结果可以为本地区花粉症防治及绿化品种的选择提供可靠依据.
- 肖小军刘玉琳谢雄杰胡东生刘晓宇易海涛刘志刚
- 关键词：气传花粉飘散
- 王棕花粉变应原的分析与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的对我国南方常见的棕榈科植物王棕花粉(Roystonea regia pollen)变应原蛋白进行分离、分析与鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供基础。方法取常规方法制备的王棕花粉浸出液,采用SDS-PAGE分离王棕花粉蛋白质组分,测定其相对分子量,同时用10例对王棕花粉过敏的患者血清作Western-blot鉴定其变应原及主要变应原成分。结果SDS-PAGE显示王棕花粉有10条可辨蛋白带,其中主要条带有8条,分别为100000、66000、38000、36000、29000、30000、24000、16000和14000Mr,Western-blot结果表明,10例王棕花粉过敏患者血清全部呈阳性反应,有66000、24000、16000和14000Mr共4条致敏条带,其中分子量在16000和14000Mr的蛋白为主要变应原。结论王棕花粉变应原的分析与鉴定为临床王棕花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 孟光姚敏刘志刚宋娟娟李春林
- 关键词：变应原
- BSA-ELISA初步检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE被引量：1
- 2009年
- 目的对短穗鱼尾葵花粉粗浸液的主要变应原进行分析、鉴定。方法通过SDS-PAGE分析短穗鱼尾葵花粉蛋白质组份,采用Western blotting鉴定主要变应原,以短穗鱼尾葵花粉粗浸液包板,摸索出其包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度,采用BSA-ELISA法对短穗鱼尾葵花粉过敏患者血清进行初步检测,并与皮肤挑刺试验比较。结果短穗鱼尾葵花粉粗浸液SDS-PAGE显示有30余条蛋白条带,其中主要蛋白条带有10条,Western blotting显示5例短穗鱼尾葵花粉过敏患者的混合血清能与其中3条蛋白条带起反应,分子量分别是26000、14000和12000Mr。BSA-ELISA检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE,最适粗浸液稀释度为1:100,血清稀释倍数为1:5,生物素化抗体为1:1000,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(strepavidin-HRP)为1:1000。在此条件下BSA-ELISA与浸液皮试比较,检出结果与皮试阳性患者血清符合率为90%,与皮试阴性患者符合率为80%,与健康人对照检测符合率为100%。结论本实验对短穗鱼尾葵花粉主要变应原进行了分离和鉴定,BSA-ELISA法测定结果与皮肤挑刺试验初步比较符合率较好。
- 姚敏孟光刘志刚孔小丽
- 关键词：SDS-PAGEWESTERNBLOTTINGELISA
