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猪流感病毒分离株HA基因的克隆与序列分析被引量：4: 2007年; 从1株H3N2亚型猪流感病毒(SIV)中提取RNA,用RT-PCR方法扩增了其HA基因的全长cDNA片段,克隆后测定其核苷酸序列,并推导了相应的氨基酸序列。结果,扩增的H3N2亚型SIV HA基因长度为1 701个核苷酸,共编码566个氨基酸。核苷酸序列与已发表的中国香港、中国大陆、美国及欧洲分离的H3亚型毒株相近,核苷酸和氨基酸序列相似性均在97%以上,同属H3亚型。其HA1、HA2之间切割位点序列为PSIQSR↓G,从分子水平推论,属于非高致病力毒株。其推导的氨基酸序列中有8个糖基化位点,7个位于HA1基因的第8、22、38、63、126、165、285位点,1个位于HA2基因的154位点。研究数据已提交至GenBank,并申请到一个登录号EF569597。研究结果为我国流感病毒基因库的建立、流感疫情的监测和防制提供了理论依据和技术资料储备。; 廖晓萍刘文字周庆丰马静云; 关键词：猪流感病毒 HA基因克隆

H9N2亚型禽流感病毒ns1基因的融合表达: 2006年; 禽流感病毒(AIV)非结构蛋白NS1在病毒粒子中不存在,因此,可以通过检测NS1抗体来鉴别禽流感病毒感染鸡群和免疫鸡群.将ns1基因和T4噬菌体soc基因在大肠埃希氏菌中融合表达,融合蛋白可以作为鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群的检测抗原.采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的ns1基因(654 bp);将该片段克隆至pSOC质粒soc基因3′端,成功构建了重组质粒pSOC-NS1,用该重组质粒转化E.coliB l21(DE3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/mL的IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果表明pSOC-NS1融合蛋白相对分子质量约39 000.W estern-b lot证实,表达产物与AIV H9N2病毒感染的小鼠血清具有良好的反应性.; 陈丽谢青梅李少璃王敬师马静云毕英佐曹永长; 关键词：禽流感病毒 NS1基因

H9N2禽流感病毒HA全长基因的高效可溶表达及免疫原性研究: 2006年; 采用RT-PCR方法扩增了H9N2亚型禽流感病毒(AIV)广东株的血凝素基因HA.将HA基因克隆到笔者所设计的原核表达载体pMBX上,成功构建重组表达质粒pMBX-HA.将其转化到E.coliBL-21感受态细胞中表达,经SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为96 200的融合蛋白,表达产物占菌体总蛋白的29.5%.经蛋白可溶性分析看出,融合蛋白90%以上是以可溶形式表达的.W estern-b lot证实,可溶表达的融合蛋白与H9N2 AIV阳性血清具有良好的免疫反应性.将可溶表达的融合蛋白用体积分数为50%的N i-NTA树脂过柱纯化,用融合蛋白作抗原,通过ELISA方法,能特异性地检测出禽流感阳性血清.; 谢青梅李少璃陈丽周庆丰马静云毕英佐曹永长; 关键词：禽流感病毒 HA基因免疫原性

广东两株人禽流感H5N1毒株节段基因及蛋白特征和进化分析被引量：4: 2011年; 禽流感病毒（AIV）毒株是感染禽类和人类的重要病原体，感染人类可引起急性呼吸道传染病。目前常见的亚型有H5N1、H7N7和H9N2，其中以H5N]毒性最强。自1997年3月，禽流感H5N1毒株初次感染人类以来，截至2011年1月5日，全球共有15个国家出现感染人禽流感H5N1病毒的病例，横跨亚、非大陆，确诊病例534例，死亡312例，病死率为58．4％。其病死率在急性传染病中已名列前茅。; 钟静黄平李海涛柯昌文杨杏芬; 关键词：人禽流感急性呼吸道传染病进化蛋白

广东人类禽流感H5N1亚型血凝素和神经氨酸酶基因同源性分析被引量：1: 2011年; 目的采用生物信息学技术,寻找广东地区人类禽流感H5N1亚型基因同源毒株。方法检测广东人禽流感H5N1亚型HA和NA基因核苷酸序列,从GenBank下载国内各种动物和人类相应基因序列,采用Mega5.03和Lasergene7.1软件进行核苷酸同源性和氨基酸变异分析。结果在总共174个HA基因和173个NA基因序列中,发现广东毒株A/Guangdong/01/2006的HA和NA基因与湖南鸡和安徽鸭流感毒株同源性较高;广东毒株A/Guangdong/02/2006的HA和NA基因与香港鸟禽类流感毒株同源性较高。同源性较高的毒株基因之间,氨基酸位点存在差异,但尚未显示流行病学和临床意义。结论广东A/Guangdong/01/2006毒株与湖南鸡和安徽鸭流感毒株具有共同的最近祖先,广东A/Guangdong/02/2006毒株与香港鸟禽类流感毒株具有共同的最近祖先。; 钟静李海涛黄平; 关键词：禽流感序列同源性

H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达被引量：8: 2007年; 为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hem agglutin in,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIVHA基因cDNA长度为1 701个核苷酸,共编码566个氨基酸.BLAST分析表明,H1N1亚型SIV广东株HA基因核苷酸序列与GenBank中已发表的中国香港特别行政区、中国大陆、美国分离的经典H1亚型毒株相近,核苷酸序列同源性在89%以上.然后将HA基因的cDNA片段亚克隆至pET32 a(+)表达载体中,构建重组质粒pET32 a-H1,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达.SDS-PAGE和凝胶扫描分析表明,HA基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25.2%.经免疫印迹证实重组蛋白可以被SIV特异性抗体所识别.; 周庆丰马静云曹永长谢青梅杜礼琴毕英佐; 关键词：猪流感病毒 HA基因克隆原核表达

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广东省科技计划工业攻关项目(2004A2090102)