国家自然科学基金(30871169)
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
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- SIP1在TGF—β1诱导的人腹膜间皮细胞转分化的作用
- 2010年
- 【目的】阐明Smad作用蛋白1（Smad interacting proteinl，SIP1）与转化生长因子－β1（transforming growth factor－β1，TGF-β1）诱导的人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells）转分化（epithelial—mesenchymal transition，EMT）的关系，探讨TGF－β1可能通过调控SIP1引起腹膜间皮细胞EMT的机制。【方法】培养的人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）随机分为对照组（TGF-β1刺激Oh）和TGF－β1刺激组，通过western blot及realtime PCR检测细胞中E－钙粘素（E－eadherin）、紧密连接蛋白（claudinl）、波形蛋白（vimentin）及纤维连接蛋白（fibronectin，FN）在不同时间点（12h，24h，48h，72h）的表达；并通过western blot及realtime PCR检测相应时间点细胞中SIP1的表达。【结果】5ng／ml TGF－β1刺激后，HMrsV5细胞E-cadherin、claudinl蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性降低（P〈0．01）；vimentin、FN蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性升高（P〈0．01）；SIP1蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性上调（P〈0．01）。【结论】TGF-β1可能通过上调HMrSV5细胞SIP1表达诱导HMrSV5细胞EMT及细胞外基质（extracellular matrix，ECM）沉积，将为进一步研究腹膜纤维化的分子机制提供新的靶点。
- 周循凌光辉孙林刘伏友
- 关键词：间质细胞转化生长因子Β
- 线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞层高通透性中的作用被引量：2
- 2010年
- 目的 研究线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液（PDS）诱导人腹膜间皮细胞（HPMC）通透性升高中的作用,探讨高糖PDS导致腹膜高通透状态的分子机制.方法 体外培养HPMC,用不同浓度葡萄糖PDS加或不加抗氧化剂谷胱甘肽,培养24 h.采用跨细胞电阻（TER）技术测定HPMC通透性的变化;免疫荧光及Western印迹观察claudin-1的表达;线粒体活性氧（ROS）荧光探针检测细胞线粒体ROS的生成;线粒体呼吸链酶复合物活性检测试剂盒检测复合物Ⅰ～Ⅳ的活性变化.结果 各组细胞的TER值均随时间的延长而下降,4.25%PDS组TER值24 h内从（34.7±1.5）Ω·cm2下降至（4.3±1.4）Ω·cm2;高糖PDS使细胞间连接蛋白claudin-1的表达显著下调,葡萄糖浓度越高作用越明显;同时高糖PDS导致线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ活性较对照组下降89.2%（P＜0.01）,进而使线粒体ROS产生增加.谷胱甘肽可逆转上述指标的变化.结论 高浓度葡萄糖PDS通过抑制线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ的活性,引起HPMC的氧化损伤,进而导致腹膜间皮细胞层的高通透性增高.
- 朱雪婧凌光辉肖力彭佑铭刘虹刘映红孙林刘伏友
- 关键词：腹膜透析细胞膜通透性腹膜间皮细胞线粒体呼吸链
- mTOR通路调控肾间质成纤维细胞活化的机制被引量：5
- 2012年
- 目的探讨mTOR信号通路在肾间质成纤维细胞增生活化过程中的调控作用，并研究其抑制剂在抗肾纤维化治疗中的可行性。方法用8周龄雌性C57BL／6小鼠构建单侧输尿管结扎（UUO）肾间质纤维化动物模型（n=30），按数字随机法分为雷帕霉素组（n=15）及UUO组（n=15）。雷帕霉素组术前1d开始腹腔注射雷帕霉素（2mg·kg^-1·d^-1）至实验结束；UUO组注射生理盐水。分别于术后1、3、7、14d处死小鼠（n=3），留肾组织进行相关检测。同时，体外实验评估雷帕霉素对TGF—β诱导鼠成纤维细胞株（NIH3T3细胞）活化的干预作用。结果UUO小鼠肾组织中活化的肌成纤维细胞[α肌动蛋白（α-SMA）阳性】高表达mTOR通路下游效应因子pS6K。雷帕霉素显著抑制pS6K表达及肾间质中肌成纤维细胞的活化，改善肾小管间质损伤及纤维化程度。实时荧光定量PCR结果提示雷帕霉素组小鼠肾皮质组织中成纤维细胞特异蛋白1（FSPl）、转化生长因子B（TGF-β）、结缔组织因子（CTGF）及Ⅳ型胶原蛋白基因仅l（Co14A1）的mRNA水平显著下降。体外实验结果示TGF-β诱导小鼠成纤维细胞株（NIH3T3）的mTOR通路显著活化，并大量合成α—SMA。雷帕霉素能够明显抑制mTOR通路活性，降低细胞的纤维化活性。结论肾间质纤维化过程中成纤维细胞内的mTOR信号通路高度活化。抑制mTOR通路能够显著降低成纤维细胞的活性，改善肾间质纤维化程度。
- 陈国纯刘虹王畅周循刘伏友
- 关键词：纤维化成纤维细胞雷帕霉素
- microRNA与慢性肾脏疾病上皮-间质细胞转分化的研究进展被引量：2
- 2009年
- 张柯肖力邹莎琳孙林刘伏友
- 关键词：MICRORNA肾脏疾病腹膜透析
- 腹膜透析流出液中人腹膜间皮细胞的培养及转分化特征被引量：5
- 2010年
- 目的建立从腹膜透析(PD)流出液中分离、培养人腹膜间皮细胞(HPMC)的方法,并检测上皮黏附连接蛋白E-cadherin、紧密连接蛋白claudin-1及间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。方法从25例持续不卧床腹膜透析(CAPD)患者PD流出液中分离HPMC,并在体外进行原代培养。根据开始透析的时间分为新开管组(10例)和透析半年以上组(15例)。采用倒置相差显微镜、免疫组织化学染色和扫描电镜对培养的细胞进行鉴定;采用实时定量PCR检测细胞E-cadherin、claudin-1及α-SMAmRNA表达。结果 22例患者(新开管组10例,半年以上组12例)PD流出液分离的细胞在体外培养成活,经鉴定均具有HPMC的特征。实时定量PCR结果显示,半年以上组较新开管组分离的HPMC细胞E-cadherin、claudin-1 mRNA表达降低,α-SMA mRNA表达增高(P<0.05),提示出现了间充质细胞转分化(EMT)。结论该研究成功建立了PD流出液分离培养原代HPMC的方法,并证实长期PD患者HPMC存在EMT倾向。该研究的发现为进一步研究腹膜纤维化(PF)和超滤衰竭(UFF)提供了新的方法与实验依据。
- 周循凌光辉邹莎琳段绍斌肖力孙林刘伏友
- 关键词：腹膜透析间皮细胞细胞培养
- MicroRNA-29与纤维化疾病被引量：10
- 2011年
- 小分子RNA(microRNA,miRNA,miR)是一类由21～23个核苷酸构成的功能性非编码小分子RNA。microRNA-29(miR-29)是新近发现的一类与纤维化疾病密切相关的小分子RNA家族,研究发现miR-29可通过直接抑制多种细胞外基质蛋白表达和调控多种与纤维化相关的信号通路参与纤维化过程,并且循环中miR-29的水平还可反映肝病患者肝硬化的严重程度。
- 葛燕陈国纯孙林刘伏友
- 关键词：纤维化疾病细胞外基质
