天津市应用基础与前沿技术研究计划(06YFJMJC06900)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 动态观察变形链球菌luxS基因缺陷株生物膜的形成
- 2010年
- 目的:应用倒置荧光显微镜动态观察变形链球菌(变链菌)Ingbritt C国际标准株及luxS基因缺陷株不同时期生物膜形成的差异。方法:建立以玻片为载体的生物膜模型,分别取两菌株6、18、24、48h的生物膜,观察不同时期两菌株生物膜与玻片的黏附程度,吖啶橙(AO)荧光染色后,倒置荧光显微镜下及时观察生物膜形态及细菌之间相对活动度,并对不同时期的生物膜标本进行处理和保存,观察3个月后倒置荧光显微镜下生物膜形态有无改变。结果:应用倒置荧光显微镜可对孔板内生物膜进行直接动态观察,镜下两菌株生物膜形态多样;6h开始出现细菌聚集成膜,18～24h形成最佳,与玻片黏附牢固而不易冲掉;48h标准株生物膜附着于玻片能力较缺陷株弱,易整体滑落;两菌株生物膜标本经处理保存3个月后镜下形态未发生改变。结论:变链菌标准株与luxS基因缺陷株生物膜具有不同的空间立体结构,形态多样,且在不同时期、生物膜形态、细菌间的相互作用及黏附力不同。
- 任志明于丹妮韩育植张文娟
- 关键词：生物膜吖啶橙显微镜检查
- 变形链球菌luxS基因在硫代谢中的功能研究被引量：3
- 2011年
- 目的 采用前期实验已构建成功的luxS基因缺失的变形链球菌突变株,分析luxS基因在口腔变形链球菌的密度感应及硫代谢中的双重作用.方法 在不同硫限定条件培养基（半胱氨酸、蛋氨酸、标准株无菌上清液、S-腺苷高半胱氨酸、S-腺苷甲硫氨酸,空白对照为脑心浸液培养基）中分别对不同培养时间（24、48 h）的变形链球菌标准株和突变株的生长进行吸光度值（A值）的测定与分析,通过激光扫描共聚焦电子显微镜观察测定并比较不同培养条件下两菌株生物膜厚度的差异.结果 在半胱氨酸培养基中培养48 h,突变株生长A值及生物膜厚度均有所增长,分别为（1.301±0.009）和（45.009±0.429）μm,但未及标准株水平（P＜0.05）;在蛋氨酸及S-腺苷高半胱氨酸培养基中培养24 h,突变株的生长A值及生物膜厚度与空白对照相比均有所补充,在蛋氨酸培养基中突变株的生长A值及生物膜厚度分别为（0.448±0.028）和（37.068±2.392）μm,在S-腺苷高半胱氨酸培养基中,突变株的生长A值及生物膜厚度分别为（0.460±0.005）和（27.343±1.107）μm,但均未及标准株水平（P＜0.05）,48 h时达到标准株水平;在标准株上清液培养基中突变株的生长A值及生物膜厚度均明显增高且超过标准株水平;在S-腺苷甲硫氨酸培养基中两菌株的生长A值及生物膜厚度与空白对照相比均有不同程度的降低.结论 luxS基因在变形链球菌中不但具有密度感应功能,在硫代谢方面也发挥着一定作用.
- 于丹妮任志明韩育植张文娟
- 关键词：生物膜
- 变形链球菌AI-2活性测定及luxS基因同源重组质粒的构建被引量：8
- 2008年
- 目的构建用于转化变形链球菌的luxS基因缺失的同源重组克隆载体。方法利用哈氏弧菌（Vibrio harveyi）BB170作为报告菌株，对变形链球菌在不同生长时期诱导生物发光的能力进行测定，然后分别PCR扩增变链菌luxS基因上下游片段及质粒PJT10的红霉素抗性基因片段，采用分子克隆技术将基因片段依次双酶切后连接人载体pUC19，构建luxS基因缺失的重组质粒，转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞经筛选后，抽提重组质粒，进行酶切鉴定。结果变链菌国际标准株可诱导哈氏弧菌BB170的生物发光现象，提示变链菌中存在AI-2数量感应通路。构建的重组质粒pUCluxKO经PstI-BamHI双酶切，产物电泳在大约1000bp和5000bp处各见一条特异条带；经BamHI—KpnI双酶切，产物电泳在大约1500bp和4500bp处各见一条特异条带；经KpnI—EcoRI双酶切后，产物电泳在大约1000bp和5000bp处各见一条特异条带。结论变链菌luxS基因同源重组质粒构建成功，为进一步通过同源重组法构建变链菌luxS基因缺陷株奠定基础。
- 于丹妮韩育植韩福胜陈杰
- 关键词：链球菌基因重组质粒
