国家自然科学基金(30570630)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：屈秋民折潇翟海燕曾军燕更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- JC病毒VLP—Z的制备及其生物活性鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的利用先期重组的原核表达质粒pET15b—VP1-Z体外表达重组的蛋白VP1-Z；研究VP1-Z是否组装成VLP—Z，以及VLP—Z是否具有与野生型VLP相同的生物学活性。方法重组质粒pET15b—VP1-Z转染大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导重组蛋白VP1-Z表达；按照野生型VLP的制备方法纯化蛋白；Westernblot和考马斯亮蓝染色确定纯化蛋白及其纯度；电镜观察VLP-Z是否形成病毒样颗粒；血凝抑制试验检测VLP—Z是否具有血凝抑制活性；细胞免疫荧光检测VLP—Z能否转运进入细胞。结果超速离心法得到纯度及浓度较高的重组蛋白VLP—Z，其相对分子质量约50×10^3；电镜观察发现VLP—Z组装成病毒样颗粒，直径约45—50nm，较野生型VLP直径稍大；血凝抑制试验证实VLP-Z可以抑制人“O”型红细胞聚集；细胞免疫荧光显示，感染后VLP—Z可以转运进入HeLa细胞质及细胞核，与野生型VLP感染后相同。结论成功制备了VLP—Z，且VLP—Z具有与野生型VLP相同的生物学活性。
- 翟海燕屈秋民折潇
- 关键词：JC病毒病毒样颗粒基因治疗
- 定向基因传递载体pET15b-Z-VP1的构建被引量：1
- 2010年
- 目的在JCV VP1氨基末端插入SPA的IgG结合区(Z区),构建原核表达质粒pET15b-Z-VP1。方法PCR扩增JCV基因组VP1和SPA基因的Z片段;重组PCR连接Z片段和VP1;BamHⅠ和NcoⅠ双酶切将Z-VP1片段插入原核表达质粒pET15b。结果经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳纯化,分别得到VP1和Z片段;再用重组PCR将Z片段和VP1连接成Z-VP1重组基因;双酶切将Z-VP1插入pET15b的BamHⅠ和NcoⅠ两个酶切位点之间,并经酶切鉴定和DNA测序证实。Western blotting证明pET15b-Z-VP1在体外表达重组蛋白VP1-Z。结论成功在VP1氨基末端插入Z区,构建了原核表达质粒pET15b-Z-VP1,并体外表达重组蛋白VP1-Z。
- 折潇屈秋民翟海燕
- 关键词：基因治疗JC病毒
- JC病毒VLP-Z具有定向基因传递载体特性被引量：1
- 2013年
- 为了确定JC病毒(JCV)主要外壳蛋白VP1体外重组的病毒样颗粒(VLP-Z)是否具有定向基因传递载体的特性,我们利用二硫苏糖醇(DTT)和EGTA裂解、继之含钙离子溶液透析的方法,使VLP-Z包裹外源性DNA(PUC19)。通过PCR检测到VLP-Z包裹的外源性DNA不能被DNaseⅠ酶消化,证明外源性DNA包裹在VLP-Z内部。包裹外源性DNA(PUC19)的VLP-Z感染培养的HeLa细胞,分别提取细胞总DNA及核DNA,进行PCR检测,结果在细胞浆及细胞核中均可检测到外源性DNA,证明VLP-Z可以转运外源性DNA进入细胞核。包裹pEG-FP-N1质粒的VLP-Z转染HeLa细胞后,可在细胞内表达绿色荧光蛋白GFP。VLP-Z结合IgG后进行凝胶电泳及库马氏亮蓝染色,结果显示VP1-Z和IgG两个条带,体外结合实验中,VLP-Z可与IgG抗体结合。以上结果证明,VLP-Z具有基因传递载体的特性和IgG结合功能,可以作为定向基因传递载体。
- 曾军燕屈秋民
- 关键词：JC病毒病毒样颗粒
