江苏省自然科学基金(BK2009299)
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 相关作者：王旻李海鑫张娟周雅琼李桉栋更多>>
- 相关机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗血管内皮生长因子受体2双价单链抗体的构建表达及其活性研究被引量：2
- 2011年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子(VEGF)与其受体(VEGFR-2)的结合,构建表达了能够与VEGFR-2胞外3区(KDR3)特异结合的双价单链抗体(bivalent single-chain Fv,BsFv),并鉴定其生物活性。以KDR3特异结合单链抗体AK404(scFv AK404)基因为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)3连接两个scFv片段,将其克隆入原核表达载体pET22b,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物依次经过镍柱亲和层析纯化和透析复性;基于生物膜层表面干涉技术(Bio-LayerInterferometry,BLI)技术的体外亲和力监测实验和VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验鉴定表达产物与KDR结合的活性。酶切鉴定和DNA测序结果表明BsFv构建成功;SDS-PAGE显示37℃下1 mmol/L IPTG诱导细菌6 h获得包涵体,经镍柱亲和层析纯化和透析复性得到纯度为90%的BsFv;经Western blotting鉴定为目的蛋白;体外结合实验表明:BsFv特异性结合KDR胞外3区的亲合力约为单价抗体AK404的2倍;内皮细胞增殖抑制实验表明:BsFv可剂量依赖性地抑制HUVEC细胞增殖,且其抑制效果强于AK404。上述结果表明:BsFv在抗血管生成活性方面比其scFv具有明显优势,为进一步用于抗血管生成抗肿瘤治疗和肿瘤诊断奠定了基础。
- 丁笠王秀云齐海迪李海鑫周雅琼陈耀祖张娟王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2
- 抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体的构建及其在CHO细胞中的稳定表达被引量：4
- 2011年
- 目前报道的靶向VEGF/VEGFR基因工程抗体多为不含Fc片段的Fabs、cFv等小分子抗体,该文旨在CHO-k细胞中表达抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体。将抗VEGFR-2 scFv(AK404)基因与含有人IgG1恒定区的真核表达载体pcDNA3.1-Fc连接,重组质粒测序后经脂质体介导转染CHO-k细胞,G418加压筛选获取稳定表达细胞株。RT-PCR、western blot检测目的基因的转录、表达。测序结果表明重组质粒构建成功,RT-PCR及western blot显示目的基因成功整合到宿主基因组并表达。最终获得可稳定表达抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体的重组CHO-k细胞株,为融合抗体的大量制备和活性研究打下基础。
- 杨艳丽张娟何远李海鑫李桉栋王旻
- 关键词：VEGFR-2抗肿瘤血管生成
- 治疗性抗体药物研究与发展趋势被引量：9
- 2011年
- 单克隆抗体技术的问世,使研究和生产治疗性单抗药物成为现实。随着基因工程技术的发展,新型的重组抗体技术也随之而生。人们可以利用DNA重组技术对鼠源抗体进行人源化改造、构建合成或半合成抗体库及噬菌体抗体库,从中筛选获得人源抗体,甚至利用转基因小鼠直接获得人源抗体。抗体药物发展的趋势也从鼠源、人-鼠嵌合、人源化到全人源。近年获得批准的抗体药物以全人源为主。1996年至2008年间进入临床研究的人源化单克隆抗体中45%用于治疗肿瘤,28%个用于治疗免疫紊乱。抗体药物的发展进入研发、回报的良性循环,成了国际制药业争夺的焦点。文章就治疗性抗体发展的历史、现状、市场及未来展望作了简要综述。
- 王旻
- 关键词：治疗性抗体人源抗体
- 抗血管内皮生长因子受体2单链抗体的筛选及表达纯化被引量：4
- 2009年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子与血管内皮生长因子受体2的结合作用,采用噬菌体展示技术,从噬菌体抗体库中筛选得到血管内皮生长因子受体2的高亲和力抗体,再通过PCR分析,基因测序,序列比对等步骤挑选出高亲和力的抗体片段的基因序列AK404,转化至大肠杆菌HB2151中,大量发酵进行可溶性表达,将表达产物通过镍柱纯化,最后经SDS-PAGE鉴定,获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升发酵液614μg。定量ELISA分析显示,AK404与受体的结合呈剂量依赖性,进一步研究开发可以用于抗血管生成抗肿瘤的治疗或肿瘤诊断。
- 李海鑫张娟钱永军陆文杰林旭升周雅琼王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2噬菌体展示单链抗体
