国家高技术研究发展计划(2002AA241331)
- 作品数：6 被引量：77H指数：4
- 相关作者：谢明权覃宗华蔡建平吴绍强朱引洁更多>>
- 相关机构：广东省农业科学院中国农业大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 堆型艾美耳球虫子孢子表面抗原基因cSZ1的克隆及序列分析被引量：4
- 2004年
- 根据已报道的堆型艾美耳球虫(Eimeriaacervulina)子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA序列设计特异性引物,以孢子化12h的E.acervulina广东株卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法成功克隆了其子孢子表面抗原基因cSZ1(cSZ1(Gd))的cDNA。所克隆cSZ1(Gd)的cDNA全长940bp,其中第3～512位是其阅读框架,共编码170个氨基酸,两端为非编码区。与已报道的cSZ1基因的cDNA序列相比,cSZ1(Gd)有4个位置的核苷酸发生了变异,即原序列中第294、443、569、586位的G、G、G、A在cSZ1(Gd)分别为A、A、A、G,二者核苷酸序列的同源性为99.57%(936/940),其中阅读框架的核苷酸同源性为99.61%(508/510)。比较根据核苷酸序列推导的氨基酸序列,第294位的变异导致了所编码氨基酸由缬氨酸(V)变为异亮氨酸(I),而第443位的变异则为无义突变,氨基酸序列的同源性为99.41%(169/170)。
- 覃宗华蔡建平谢明权艾哈迈德彭新宇魏文康吴惠贤
- 关键词：堆型艾美耳球虫子孢子表面抗原基因克隆球虫病
- 鸡球虫疫苗研究进展被引量：51
- 2005年
- 鸡球虫病是生产中严重危害养禽业的寄生虫病,长期以来以药物防治为主。目前,由于球虫耐药性的普遍存在,加上消费者对禽产品药物残留问题的关注,采用疫苗防治球虫病为人心所向。球虫活苗在实际生产中发挥了一定的作用,但由于球虫活苗存在"复壮"的可能且使用麻烦,人们将目光转向了分子疫苗。球虫基因组学研究为基因工程苗开发奠定了基础,目前已经筛选了上百个功能抗原基因。受表达系统的限制,原核表达的重组蛋白抗原性较差,虽有较多尝试,但鲜有成功。人们在探索体外真核表达(如酵母、杆状病毒表达系统等)的同时,核酸疫苗以其独特的诱发高水平细胞免疫反应的能力而倍受青睐,近几年发展较快。
- 吴绍强蒋金书刘群朱引洁
- 关键词：疫苗研究细胞免疫反应分子疫苗基因工程苗复壮
- 堆型艾美耳球虫cSZ1基因在减毒沙门氏菌的表达及免疫保护效果研究
- 用PCR 方法扩增堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)广东株(GD)子孢子表面抗原基因cSZ1的阅读框架(ORF),与质粒表达载体pYA3342连接后转化大肠杆菌E.coli x6212,荻得阳性重组质...
- 覃宗华谢明权蔡建平艾哈迈德叶秀华
- 关键词：堆型艾美耳球虫减毒鼠伤寒沙门氏菌免疫保护
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫BJ株核酸疫苗的构建及免疫保护效果研究
- 将E.tenella BJ株的保护性抗原基因TA4插入真核表达载体中,然后在其上游融合方式插入Et1A基因,构建成核酸疫苗并进行体外表达。IFAT检测表明,pCT转染细胞的荧光亮度高,pCTE载体大,转染效率低,荧光较弱...
- 吴绍强蒋金书刘群朱引洁
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗体外表达
- 文献传递
- 鸡白细胞介素15基因的克隆及序列分析
- 2005年
- 根据GenBank中所收录的鸡白细胞介素-15(ChIL-15)的cDNA序列设计特异性引物,以经ConA刺激3 h的科宝鸡脾脏淋巴细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法克隆获得了ChIL-15的cDNA.ChIL-15的cDNA全长655 bp,其中第84位～644位是该基因的阅读框(ORF),共编码187个氨基酸.将所克隆的序列与已报道序列相比较,二者核苷酸的同源性为100%(655/655),所编码蛋白质的氨基酸序列同源性也为100%.
- 叶秀华彭小亮覃宗华谢明权蔡建平陈闻王佩瑶
- 关键词：白细胞介素-15基因克隆
- 柔嫩艾美耳球虫BJ株核酸疫苗的构建及其免疫保护效果研究（英文）
- 将E.tenella BJ株的保护性抗原基因TA4插入真核表达载体中,然后在其上游融合方式插入EtlA基因,构建成核酸疫苗并进行体外表达。IFAT检测表明,pcDT转染细胞的荧光亮度高,pcDET载体大,转染效率低,荧光...
- 吴绍强蒋金书朱引洁刘群
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗体外表达免疫抗球虫指数
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫BJ株TA4基因的表达及电泳分析被引量：5
- 2004年
- 球虫子孢子表面抗原TA4(25kD)是通过二硫键连接8和17kD 2条多肤形成的,在孢子化后期合成。E.tenella BJ株的TA4基因同国外株的同源性为99％。本试验进行了TA4基因的原核融合表达,并对表达蛋白的SDS-PAGE电泳特性进行探究。试验发现,以pGEX-KG为载体,用IPTG可诱导TA4基因在E.coli BL21(DE3)中的表达。SDS-PAGE表明,融合蛋白大小约43 kD,而非推测的51 kD,诱导6 h的蛋白表达量即可达到较高水平,表达量约为31％。采用抗GST抗体进行Western blotting,成功检测到了特异性条带。说明SDS-PAGE前的样品煮沸处理可使连接TA4 2条多肽的二硫键断裂,只有17 kD的多肽可与26 kD GST蛋白结合。样品采用反复冻融法处理,加入还原型谷胱苷肽后,采用GST凝胶回收柱Sepharose 4B纯化的融合蛋白主要为51 kD的单一条带,煮沸变性后电泳,则43 kD带含量增加。说明纯化过程可影响GST-TA4融合蛋白的特性。
- 吴绍强蒋金书刘群朱引洁
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因表达电泳分析
- 鸡α-干扰素基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 试验采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从鸡脾淋巴细胞中扩增出鸡的α干扰素(ChIFN-α)基因,将包括ChIFN-α编码区的cDNA片段克隆到pMD 18-T载体中,并对该片段进行序列测定,序列分析表明克隆的ChIFN-α基因的开放阅读框(ORF)为582bp,与GenBank内已发表的ChIFN-α序列进行对比,同源性高达98.6%～99.8%。进一步分析各国家和地区上传至GenBank的ChIFN-α基因发现,ORF和编码的氨基酸长度一致,未见地域变化特征。
- 宋鸿雁李艳肖瑾范光辉薄新文李祥瑞
- 关键词：Α干扰素克隆
- 堆型艾美耳球虫cSZ1基因在减毒沙门氏菌的表达及免疫保护效果研究被引量：18
- 2005年
- 用PCR方法扩增堆型艾美耳球虫广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的阅读框架 (ORF) ,与质粒表达载体pYA3342连接后转化大肠杆菌E-coliX6 2 12 ,获得阳性重组质粒后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)X4 5 5 0。经IPTG诱导获得了cSZ1基因在减毒S typhimurium的高效表达 ,表达产物占菌体总蛋白的 9 2 % ,重组蛋白分子量约为 19kDa。将重组减毒S typhimurium分别以 10 8或 10 9CFU 鸡经口免疫 4日龄岭南黄肉鸡 ,免疫后两周血清中可检测到抗cSZ1的特异性IgG ,3周时抗体水平达到峰值 ;2 5日龄时可在肠道检测到特异性IgA的分泌。免疫后 3周 ,试验鸡分别经口攻击感染 5 0 0个E acervulina孢子化卵囊 ,结果显示免疫组与非免疫组有相似的排卵囊曲线 ;计数攻虫感染后第 3 5～ 9 5天卵囊总产量 ,2个免疫组分别能降低 2 5 . 1%和 4 6 . 4 %的卵囊产生。
- 覃宗华谢明权蔡建平艾哈迈德叶秀华
- 关键词：堆型艾美耳球虫减毒沙门氏菌免疫保护孢子化卵囊IPTG广东株
- 鸡艾美耳球虫抗原基因在减毒沙门氏菌的共表达及免疫效果研究
- 本研究以孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法克隆获得了毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株子孢子微线蛋白-2基因(EnMIC2)和堆型艾美耳球虫(E.acervulina)广东株子孢子表面抗...
- 覃宗华蔡建平谢明权叶秀华王佩瑶陈闻
- 关键词：毒害艾美耳球虫堆型艾美耳球虫减毒鼠伤寒沙门氏菌共表达
- 文献传递
