国家自然科学基金(30370623)
- 作品数：11 被引量：52H指数：5
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- 线粒体膜电位对缺氧人肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用被引量：9
- 2006年
- 目的研究线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)的开放剂二氮嗪和线粒体膜电位在缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用。方法培养HPASMC并将所培养的细胞分为6组正常对照组(A组);MitoKATP阻断剂5-羟基癸酸盐(5-HD)组(B组);MitoKATP开放剂二氮嗪组(C组);慢性缺氧组(D组);慢性缺氧+二氮嗪组(E组);慢性缺氧+5-HD组(F组),每组样本数均为6。利用激光共焦显微镜成像检测线粒体膜电位,荧光染色检测细胞内氧自由基含量,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、c-fos及c-jun的蛋白表达和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况。结果C、D、E组细胞线粒体膜电位(以R123的荧光强度表示)分别为105±4、95±13、126±8,较A组(75±7)明显去极化(q值分别为5.474、3.659、9.213,P均<0.05);C、D、E组细胞内氧自由基含量分别为3045±126、3116±34、3236±31,与A组(2772±49)比较差异有统计学意义(q值分别为6.882、7.448、16.289,P均<0.05);C、D、E组细胞增殖活性[以MTT法检测出的A值表示]分别为0.305±0.022、0.328±0.078、0.440±0.023,与A组(0.237±0.013)比较差异有统计学意义(q值分别为2.993、4.017、8.919,P均<0.05),且E组线粒体膜电位、细胞内氧自由基含量、细胞增殖活性与D组比较差异有统计学意义(q值分别为5.554、8.841、4.902,P均<0.05)。F组线粒体膜电位、细胞内氧自由基含量、细胞增殖活性分别为71±4、2863±132、0.264±0.045,与D组(95±13、3116±34、0.328±0.078)比较差异有统计学意义(q值分别为4.367、5.907、2.832,P均<0.05)。结论二氮嗪或缺氧能够通过开放HPASMC线粒体膜上ATP敏感的钾通道,引起线粒体膜电位去极化,增加细胞内氧自由基的含量,最终导致HPASMC的增殖/凋亡的失衡,从而促进了缺氧性肺动脉重塑过程。
- 胡红玲汪涛张珍祥赵建平徐永健
- 关键词：肺动脉细胞低氧线粒体膜电位
- Diazoxide对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用被引量：9
- 2007年
- 目的:研究线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide和线粒体膜电位(ΔΨm)在缺氧导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用,探索缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压形成的发生机制。方法:取大鼠正常肺组织,分离出肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)进行常氧或慢性缺氧培养。将样本分为6组:①正常对照组;②线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide组;③MitoKATP阻断剂5-HD组;④慢性缺氧(CH)组;⑤CH+diazoxide组;⑥CH+5-HD组。利用激光共焦显微镜(Leica SP-1 USA)成像检测线粒体膜电位,荧光染色检测细胞内氧自由基含量,流式细胞仪检测细胞周期和MTT法检测细胞增殖情况。结果:①Diazoxide作用24 h后,R-123荧光强度明显强于正常对照组,线粒体膜电位去极化,细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组,细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组,P<0.05;而5-HD作用24 h后,上述指标与正常对照组相比较,均无显著差异,P>0.05;②慢性缺氧24 h,结果与di-azoxide组相似,R-123荧光强度明显强于正常对照组,线粒体膜电位去极化,细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组,细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组,P<0.05;CH+diazoxide组,R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显强于缺氧组,细胞内氧自由基含量明显高于缺氧组,细胞增殖明显多于缺氧组、凋亡少于缺氧组,P<0.05;CH+5-HD组,R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显弱于缺氧组,细胞内氧自由基含量明显低于缺氧组,细胞增殖明显少于缺氧组、凋亡多于缺氧组,P<0.05;R-123荧光强度、MTT的A值与细胞内氧自由基含量均呈显著正相关;凋亡细胞百分比与细胞内氧自由基含量呈显著负相关。结论:本实验结果显示,diazox-ide能够通过开放线粒体膜上ATP敏感的钾通道,引起ΔΨm去极化,ΔΨm的变化影响细胞内
- 胡红玲汪涛张珍祥赵建平徐永健
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞缺氧线粒体膜电位线粒体ATP敏感性钾通道
- 低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞中活性氧与低氧诱导因子-1α和细胞增殖的关系(英文)被引量：11
- 2007年
- 在低氧条件下,观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)中活性氧(reactive oxygenspecies, ROS)的变化,探讨 ROS 的变化是否通过调控低氧诱导因子 -1α (hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)的表达影响 PASMCs的增殖。采用组织块法原代培养大鼠PASMCs,分成3 组:常氧组(21% O2, 24 h),低氧组(5% O2, 24 h),低氧+ Mn-TBAP组(5% O2,24 h,Mn-TBAP 是一种ROS 清除剂)。用激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS 的变化;用RT-PCR 和免疫组织化学方法分别测定HIF-1α mRNA 和蛋白的表达;用MTT 法检测细胞增殖程度。结果显示:(1) 低氧组 PASMCs内ROS水平明显高于常氧组(P<0.05),低氧+ Mn-TBAP 组ROS 水平明显低于低氧组(P<0.05),但仍高于常氧组(P<0.05) ;(2)低氧组及低氧+ Mn-TBAP 组的HIF-1α mRNA 和蛋白表达均高于常氧组(P<0.05),且低氧组表达高于低氧+ Mn-TBAP 组(P<0.05) ;(3) 低氧组细胞增殖明显高于常氧组和低氧+ Mn-TBAP 组(P<0.05),低氧+ Mn-TBAP 组细胞增殖高于常氧组(P<0.05)。结果表明:在低氧条件下大鼠PASMCs 中 ROS 水平明显升高,且ROS 的变化能够调节HIF-1α的表达,进而影响平滑肌细胞的增殖,提示ROS 可能在肺动脉高压的发病机制和低氧信号转导中具有重要作用。
- 赵建平周志刚胡红玲郭治汪涛甄国华张珍祥
- 关键词：低氧平滑肌细胞活性氧
- 缺氧肺动脉平滑肌细胞中线粒体ATP敏感钾通道开放对细胞色素C的分布及细胞增殖的作用被引量：14
- 2006年
- 为了探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitochondrial ATP-sensitive K^+channel,mitoK_(ATP))和线粒体膜电位(ΔΨm)在细胞缺氧信号转导中的作用以及对缺氧肺动脉平滑肌细胞中细胞色素C在细胞内的分布及细胞增殖的影响,本实验将人肺动脉平滑肌细胞进行常氧或24h缺氧培养,并将标本分为六组：(1)对照组；(2)mitoK_(ATP)开放剂diazoxide组；(3)mitoK_(ATP)阻断剂5-HD组：(4)24h缺氧组：(5)24h缺氧+diazoxide组；(6)24h缺氧+5．HD组。利用激光共聚焦显微镜成像法检测ΔΨm：线粒体/胞浆成分分离试剂盒(BioVision)分离线粒体和胞浆成分后,Western blot检测两者细胞色素C：Western blot检测细胞中caspase-9的蛋白表达量；MTT法及PI染色后流式细胞仪检测细胞增殖情况。结果显示：(1)diazoxide作用24h后,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少,与正常对照组相比较,均P＜0．05；而5-HD作用24h与正常对照组比较,上述指标无明显变化(P＞0．05)。(2)缺氧24h组,结果与diazoxide组相似,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少,与正常对照组相比较,均P＜0．05：24h缺氧+diazoxide组与缺氧组相比较,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少(P＜0．05)；而24h缺氧+5-HD组与缺氧组比较,R-123荧光明显降低,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显升高,caspase-9的蛋白表达显著增加,细胞增殖明显减少、凋亡增多(P＜0．05)。上述实验结果提示,缺氧可以引起mitoK_(ATP)的开放以及ΔΨm的去极化,并进而抑制细胞色素C从线粒体释放到胞浆,抑制线粒体凋亡途径,从而参与并影响肺动脉高压
- 胡红玲张珍祥赵建平汪涛徐永健
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞缺氧线粒体膜电位细胞色素C
- 粘着斑激酶活性对气道上皮细胞粘附迁移的影响被引量：1
- 2005年
- 目的研究粘着斑激酶(FAK)磷酸化对细胞外基质成份诱导的气道上皮细胞粘附、迁移的影响,探讨FAK活化对气道上皮细胞损伤后修复的影响机制。方法通过纤维连接蛋白(FN)诱导培养的气道上皮细胞,以计数法测定细胞粘附率,以损伤实验测定细胞迁移速度,以Westernblot和免疫共沉淀检测FAK表达水平及其酪氨酸磷酸化程度;以反义FAK寡核苷酸(ODNs)经脂质体转染细胞,观察其对FAK表达和磷酸化、细胞粘附和迁移的影响。结果FN诱导的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显增高,同时FAK表达水平及其酪氨酸磷酸化程度显著增高;经脂质体转染了反义FAK寡核苷酸的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显降低,同时FAK表达水平及其酪氨酸磷酸化程度降低,且与气道上皮细胞粘附率和迁移速度的降低成显著正相关。结论FAK是细胞外基质诱导气道上皮细胞粘附、迁移的重要信号分子,其活化促进气道上皮细胞的粘附和迁移,在气道上皮细胞损伤后修复过程中起重要作用。
- 许丽汪涛张珍祥徐永健
- 关键词：粘着斑激酶气道上皮细胞
- COPD合并慢性缺氧患者肺血管对急性缺氧反应变化中肺动脉平滑肌细胞钾通道的作用被引量：2
- 2006年
- 目的:以人离体肺动脉环缺氧张力变化为对象研究钾通道在缺氧性肺血管收缩(HPV)发生中的作用。方法:从手术室切取人肺动脉环,进行人肺动脉环张力试验,分正常对照组,单纯慢性阻塞性肺病(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD)组和COPD合并慢性缺氧组,分别利用相应的特异性阻断剂观察电压门控性钾通道(KV),钙离子激活的钾通道(KCa),ATP敏感的钾通道(KATP),在缺氧性肺血管收缩(HPV)的作用。结果:(1)3组肺动脉环在急性缺氧时血管收缩张力均增加,同时COPD+慢性缺氧组增加百分比显著低于对照组;COPD组与对照组无显著差异。(2)4-AP阻断Kv后较阻断前,3组肺血管环缺氧张力增加幅度均显著降低(P<0.05),同时正常对照组和COPD组降低幅度明显大于慢性缺氧组。TEA阻断KCa后以及格列苯脲(glybenclamide)阻断KATP后二者较阻断前,3组肺血管环缺氧张力均显著增加(P<0.05),同时COPD+慢性缺氧组增加的幅度明显大于正常组(分别是P<0.01和P<0.05)。结论:(1)慢性缺氧可降低肺血管的收缩性及肺血管对急性缺氧的收缩反应;(2)Kv在3组人离体肺动脉环HPV反应中均起介导作用,慢性缺氧可使此介导作用加强;KCa和KATP在3组人离体肺动脉环HPV反应中均起调节作用,慢性缺氧可使此调节作用加强。
- 汪涛张珍祥徐永健
- 关键词：肺动脉钾通道电压门控钙激活缺氧
- 线粒体ATP敏感钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α表达及细胞增殖的作用被引量：5
- 2007年
- 本文旨在探讨线粒体ATP敏感钾(mitochondrial ATP-sensitive K+,MitoKATP)通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达和细胞增殖的影响。原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,分为常氧对照组、常氧+diazoxide(MitoKATP通道的选择性开放剂)组、常氧+5-hydroxydecanoate(5-HD,MitoKATP通道的选择性阻断剂)组、低氧对照组、低氧+diazoxide组、低氧+5-HD组,共6组,分别应用罗丹明123荧光技术检测各组大鼠肺动脉平滑肌细胞的线粒体膜电位,免疫组化检测HIF-1α的表达及酶联免疫检测仪检测细胞增殖的变化。结果显示,常氧+ diazoxide组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强(P<0．05);低氧+diazoxide组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强(P<0.05):常氧+5-HD组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达、细胞增殖没有明显变化(P>0．05);但低氧+5-HD组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光明显减弱、HIF-1α表达及细胞增殖有所减弱(P<0．05)。结果提示:MitoKATP通道的开放能引起大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体膜去极化,并可以促进HIF-1α的表达及细胞增殖。
- 赵建平郭治周志刚陈俊胡红玲汪涛张珍祥
- 关键词：低氧低氧诱导因子-1Α线粒体膜电位平滑肌
- 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐下调基质金属蛋白酶9表达机制的研究被引量：7
- 2009年
- 目的探讨TNF-α诱导的肺泡巨噬细胞(AM)性基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的信号通路以及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对MMP-9表达的影响机制。方法从慢性阻塞性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液中分离与培养AM,以PDTC预处理AM,以TNF-α或IL-1刺激AM。半定量逆转录-聚合酶链反应法检测MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测MMP-9蛋白的表达及TNF-α或IL-1诱导的IκBα磷酸化水平。凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果TNF-α上调AM源性MMP-9 mRNA和蛋白的表达(P<0.05);PDTC抑制TNF-α诱导的MMP-9的表达(P<0.05)。PDTC对TNF-α或IL-1诱导的IκBα的磷酸化均无抑制作用(P>0.05)。PDTC对TNF-α或IL-1诱导的NF-κB的活化均有抑制作用(P<0.05);且PDTC不能在体外直接抑制NF-κB的DNA结合活性(P>0.05)。结论NF-κB在TNF-α诱导的AM源性MMP-9的表达中起着重要作用;PDTC可能通过抑制泛素化-蛋白酶小体途径来下调TNF-α诱导的AM源性MMP-9的表达。
- 李亚清张珍祥
- 关键词：核因子ΚB吡咯烷二硫代氨基甲酸盐基质金属蛋白酶IΚBΑ
- 线粒体膜电位对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内细胞色素C分布及细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的从线粒体ATP敏感性钾通道(MitoKATP)入手,研究在缺氧影响大鼠肺动脉平滑肌细胞内细胞色素C的分布及其引起细胞增殖变化中线粒体膜电位(Δψm)的作用。方法获取大鼠正常肺组织,分离出肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)进行常氧或慢性缺氧培养。将标本分为6组:①正常对照组;②MitoKATP开放剂Diazoxide组;③MitoKATP阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD)组;④慢性缺氧(CH)组;⑤CH+Diazoxide组;⑥CH+5-HD组。利用激光共聚焦显微镜成像检测线粒体膜电位,Western blot法检测线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT法检测细胞增殖情况。结果①Diazoxide作用24 h后,细胞R-123荧光强度明显增强,线粒体膜电位去极化,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显降低,细胞明显增殖,凋亡减少,与正常对照组比较均P<0.05;而5-HD作用24h与正常对照组比较,上述指标无明显变化,均P>0.05;②慢性缺氧24 h,结果与Diazoxide组相似,各项指标与正常对照组比较均P<0.05;CH+Diazoxide组与CH组比较,细胞R-123荧光强度明显增强,线粒体膜电位去极化,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显降低,细胞明显增殖,凋亡减少,与CH组比较均P<0.05;CH+5-HD组与CH组比较,细胞R-123荧光强度明显减弱,线粒体膜电位部分消失,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显升高,细胞增殖减少,凋亡增多,与CH组比较均P<0.05。结论缺氧可以引起MitoKATP的开放以及线粒体膜电位去极化,进而抑制了细胞色素C从细胞线粒体释放到细胞质,抑制线粒体凋亡途径,从而参与并影响了肺动脉高压的发生发展。
- 胡红玲张珍祥汪涛赵建平徐永健
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞缺氧钾通道线粒体膜电位细胞色素C
- 慢性阻塞性肺疾病合并慢性缺氧患者肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道亚型基因表达的变化被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨人肺动脉平滑肌细胞(PASMCS)的几种KV通道亚型:KV1．2、KV1．3、KV1．5、KV2．1、KV3．1 等,在COPD合并慢性缺氧时基因表达的变化。旨在探索预防人类肺源性心脏病的发生和找到新的防治方法提供试验依据。方法:从手术室切取人正常肺组织、单纯COPD患者和COPD合并慢性缺氧患者肺组织,将标本分为:①正常对照的PASMCS、单纯COPD和COPD合并慢性缺氧患者的PASMCS;⑵正常对照的PASMCS和经过慢性缺氧培养的 PASMCS。利用半定量RT-PCR技术,分析,KV1．2、KV1．3、KV1．5、KV2．1、KV3．1等的基因表达。结果:①KV1．2、KV1．3、 KV1．5、KV2．1、KV3．1等基因在正常PASMCS和单纯COPD患者PASMCS中均有表达,而且两者无显著差异;②KV1．2、 KV1．5、KV2．1在患者在体慢性缺氧和离体慢性缺氧时的表达均明显降低(P<0．05);KV1．3在患者在体慢性缺氧时表达明显降低(P<0．05),而离体慢性缺氧时无显著变化(P>0．05);KV3．1在患者在体慢性缺氧和离体慢性缺氧时的表达均无显著变化(P>0．05);③KV1．2、KV1．5、KV2．1、KV3．1等基因在单纯COPD时表达显著上调(P<0．05)。结论: 在慢性缺氧情况下,KV1．2、KV1．3、KV1．5、KV2．1 4种亚型基因表达明显下降,提示可能在促进人肺动脉高压的形成和发展中起重要作用。而慢性缺氧对KV3．1基因表达无显著影响,提示它们可能对缺氧不敏感,在人肺动脉高压发生中处于次要地位。至于在单纯COPD时几种亚型的表达上调,原因不清楚,需进一步研究证实。
- 汪涛张珍祥徐永健
- 关键词：肺动脉缺氧
