安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2010A240)
- 作品数：12 被引量：62H指数：3
- 相关作者：陈昌杰杨清玲高艳军杨志峰蔡颖更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院蚌埠市中心医院河南大学更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ-N端肽联合三氧化二砷对乳腺癌生长和转移的抑制作用被引量：1
- 2013年
- 目的利用荷乳腺癌动物模型观察病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ-N端肽(NT21MP)联合三氧化二砷(As2O3)对乳腺癌生长和肺转移的抑制效应,为选择最佳的乳腺癌治疗方案提供依据。方法建立荷乳腺癌BALB/c小鼠模型,测量荷瘤小鼠的肿瘤大小,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤病理组织学变化和肺转移情况;苦味酸浸泡法计数肺结节;利用TUNEL法及免疫组化SP法检测各组原发肿瘤组织中细胞凋亡指数(AI)以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 NT21MP和As2O3均可抑制原发瘤的生长,抑制率分别为30.4%和40.0%,联合用药效果更显著(54.4%)。NT21MP和As2O3均可抑制肺转移,以两者联合用药作用更明显。与生理盐水对照组相比,NT21MP组、As2O3组及NT21MP+As2O3组增殖细胞核抗原指数明显降低(均P<0.05),凋亡指数明显升高(均P<0.05),以联合用药作用更明显(P<0.05)。结论 NT21MP和As2O3可通过抑制增殖、促进凋亡而抑制肿瘤的生长和转移,并具有协同效应。
- 陈素莲郭玉红童芳李自岩张枫杨清玲陈昌杰
- 关键词：乳腺癌三氧化二砷
- 病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ的研究进展
- 2015年
- 病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ（viral macro-phage inflammatory protein-Ⅱ,v MIP-Ⅱ）也称v CCL2,是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）感染者或移植病人用免疫抑制剂后卡波肉瘤的病原体卡波西肉瘤相关孢疹病毒,即人疱疹病毒-8 K4基因编码的小分子蛋白质,与人CC类趋化因子巨噬细胞炎性蛋白Ⅰ在氨基酸序列上有较高的同源性,是人趋化因子的类似物。
- 张枫杨清玲
- 关键词：趋化因子趋化因子受体受体拮抗剂
- ^(99m)Tc-CXCR4抑制性多肽在荷乳腺癌小鼠显像中的应用
- 2013年
- 目的:探讨99mTc标记拮抗趋化因子受体(CXCR4)来源于病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽(NT21MP)作为乳腺癌SPECT显像剂的应用价值。方法:预锡化法标记NT21MP,纸层析法测99mTc-NT21MP放化纯及其在血浆中的稳定性;制备荷乳腺癌小鼠模型,静脉注射99mTc-NT21MP行SPECT显像,并计算靶/非靶(T/NT)比值;免疫组织化学法检测肿瘤组织CXCR4的表达和肺组织SDF-1α的表达。结果:预锡化法标记99mTc-NT21MP放化纯达95%;血浆中2 h内稳定,2 h放化纯>90%;99mTc-NT21MP注射后能靶向肿瘤组织,2 h的T/NT比值达4.6;肿瘤组织高表达CXCR4,而肺组织高表达SDF-1α。结论:99mTc-NT21MP易于制备,具有较高的靶向性,在CXCR4阳性肿瘤的早期诊断中具有较高的应用价值。
- 丁勇兴李辉孙俊杰杨清玲陈昌杰王本忠
- 关键词：乳腺肿瘤趋化因子受体小鼠
- MicroRNA在肿瘤EMT调控中的作用被引量：1
- 2014年
- MicroRNA（miRNA）是一类长度约19-25个核苷酸的小分子非编码RNA，通过翻译抑制或MRNA降解发挥转录后水平调控基因表达。研究表明，miRNA在上皮细胞-间充质转化（EMT）调控中发挥关键的角色。 EMT是上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程，上皮细胞黏附分子如E-钙粘素等表达减少或缺失，细胞失去极性；细胞具有间充质特征，获得了较高的迁移与侵袭能力，间质特征性分子，如Twist、Snail、Slug和Vimentin 等表达增高。近年来发现，miRNA 参与调控肿瘤细胞发生EMT改变。本文着重对EMT形成过程中miRNA的作用进行扼要综述。此外，回顾分析各种肿瘤中MiRNA的角色，靶向miRNA可能会成为癌症治疗的新型策略。
- 黄静蔡颖朱丽华卢晓辉夏春磊许涛杨清玲陈昌杰
- 关键词：MIRNAEMT肿瘤
- 病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ N端肽调控SDF-1α/CXCR4诱导趋化机制被引量：2
- 2012年
- 目的:评价病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽(NT21MP)是否通过干扰SDF-1α/CXCR4信号抑制人乳腺癌细胞株SKBR3细胞的趋化作用。方法:以RT-PCR和免疫组化检测SKBR3和MCF-7两种人乳腺癌细胞中CXCR4的表达;用细胞转移实验检测在NT21MP存在或缺乏的情况下SDF-1α诱导SKBR3细胞的趋化作用;以Fluo3/AM为细胞内游离钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定NT21MP对SDF-1α诱导SKBR3细胞内游离钙浓度的影响;Western blot分析ERK1/2和FAK蛋白的磷酸化水平变化。结果:相对于MCF-7细胞,SKBR3细胞中CXCR4蛋白表达水平较高;经SDF-1α处理后,SKBR3的迁移能力提高,CXCR4抑制剂AMD3100可有效抑制SKBR3细胞的迁移,细胞经NT21MP预处理后,可剂量依赖性地抑制SKBR3细胞的迁移(P<0.05);NT21MP也可抑制由SDF-1α诱导的细胞内Ca2+峰值(P<0.05),而钙离子浓度升高是SKBR3细胞迁移的重要信号之一;另外,相对于阴性对照组,NT21MP也可下调SDF-1α诱导的SKBR3中信号蛋白ERK1/2和FAK的磷酸化水平(P<0.05)。结论:NT21MP可抑制SDF-1α诱导的SK-BR3细胞的迁移,可能与其上游钙离子释放和ERK1/2及FAK磷酸化阻断信号有关。
- 杨清玲丁勇兴陈昌杰杨志峰高艳军
- 关键词：CXCR4胞外信号调节激酶
- 趋化因子SDF-1与受体CXCR4的研究进展被引量：35
- 2011年
- 趋化因子SDF-1(stromal cell-derived factor-1)与其受体CXCR4(CXC chemokine receptor4)分别属于CXC类趋化因子和CXCR类G蛋白偶联受体超家族。功能研究表明,SDF-1/CXCR4轴在机体的免疫、炎症、胚胎发育、器官发生、肿瘤、HIV病、WHIM综合征等多种生物学过程中发挥着重要的作用,已成为当今生物学研究的热点之一。本文对SDF-1及CXCR4的结构、信号转导、生物学意义就当前研究的进展情况进行了综述。G蛋白依赖的信号转导通路和非G蛋白依赖的信号转导通路两个方面(见图1)。1.2非G蛋白依赖的信号转导通路SDF-1与CXCR4结合后可以通过其自身构象的改变激活非受体酪氨酸激酶JAK2、JAK3,从而活化JAK-STAT信号通路。JAK-STAT信号通路的活化与细胞的免疫反应及细胞的发育和肿瘤的发生密切相关。此外,活化后的CXCR4羧基末端可被G蛋白调节激酶(GRK)磷酸化,这一结果促进了其与β-arrestins结合。CXCR4-β-arrestin复合物具有多种生物学功能:诱导CXCR4的内化;抑制G蛋白依赖的信号转导通路的活化;与GTPaseRaf结合激活p42/44MAPK信号通路;激活ASK1而活化p38MAPK信号通路。其中两条MAPKs信号通路的活化与SDF-1诱导细胞的趋化、迁徙密切相关[5]。2SDF-1/CXCR4生物学意义2.1SDF-1/CXCR4与胚胎发育、器官发生SDF-1或CXCR4基因敲除的小鼠会出现心脏室间隔缺损、小脑发育异常、造血细胞生成的减少、肠道血管发育的异常以及造成小鼠胚胎期死亡或出生后生存期缩短的现象。现在已证实在胚胎细胞、造血干细胞及神经细胞等早期细胞表面已有CXCR4表达,这可能与上面这些现象的出现有关。最近也证实了SDF-1/CXCR4在促进损伤组织修复中的作用,这也从另一个侧面证明了SDF-1/CXCR4与早期细胞的分化及生长的关系。Takahashi综述了SDF-1/CXCR4在心肌梗塞病理生理过程中的作用[6]。以上这些都说明了SDF-1/CXCR4在胚胎发育、器官发生�
- 杨志峰杨清玲陈昌杰
- 关键词：SDF-1CXCR4信号转导
- 微小RNA-21对人乳腺癌细胞株紫杉醇耐药性的影响及其机制被引量：13
- 2015年
- 目的：探讨微小RNA-21（miR-21）对人乳腺癌细胞MCF-7和SKBR-3及其紫杉醇耐药株细胞生物学活性的影响。方法：体外研究采用紫杉醇逐步加量诱导法建立人乳腺癌细胞紫杉醇耐药株；通过观察细胞形态的变化和检测耐药基因MDRl、BCRP、MRPl的表达以鉴定耐药细胞株；检测MCF-7和SKBR-3亲本及耐药细胞中miR-21和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达水平；用miR-21抑制剂和模拟物分别转染MCF-7和SKBR-3耐药和亲本细胞株，MrIT法和流式细胞术检测转染miR-21抑制剂后细胞对紫杉醇的敏感程度和细胞周期、凋亡的变化，并检测耐药基因和凋亡相关基因的表达。结果：成功建立人乳腺癌细胞紫杉醇耐药株MCF-7／PR和SKBR-3／PR，耐药细胞株中耐药基因MDRl、BCRP、MRPl表达均升高，抗凋亡基因Bcl-2升高，凋亡基因Bax下降，miR-21表达升高（P〈0．05）；与对照组比较，miR-21抑制剂可提高耐药细胞株对紫杉醇的药物敏感性，增加细胞凋亡水平，增加细胞周期中G0／G1期细胞（P〈0．05），并可抑制耐药细胞株耐药基因的表达，降低Bcl-2／Bax比值（P〈0．05），而miR-21模拟物可刺激亲本细胞出现耐药细胞形态改变，并上调耐药基因的表达及Bcl-2／Bax比值（P〈0．05）。结论：乳腺癌紫杉醇耐药细胞株MCF-7／PR和SKBR．3／PR中miR-21表达上调；抑制miR-21表达可逆转人乳腺癌MCF-7／PR、SKBR-3／PR细胞株对紫杉醇化疗的耐药性。
- 赵遵兰蔡颖王洋洋夏春磊李从新陈素莲杨清玲陈昌杰
- 关键词：微RNAS抗药性
- vMIP-ⅡN端重组肽的表达纯化及活性鉴定被引量：2
- 2010年
- 病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(viralmacrophageinflammatoryprotein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)由卡波西肉瘤疱疹病毒编码,前期研究证明了vMIP-IIN端21肽(NT21MP)选择性的阻断趋化因子CXCR4,从而抑制乳腺癌细胞趋化的活性。通过化学合成法获得编码vMIP-ⅡN末端的基因序列,与pGEX-KG(克隆位点的N-端有谷胱甘肽转移酶GST标签序列)连接构建原核表达载体,重组质粒在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中获得表达,免疫印迹显示重组蛋白GST-NT21MP主要在细菌裂解液上清中表达,可溶性部分经亲和层析、超滤、快速蛋白液相色谱(fastproteinliquidchromatography,FPLC)纯化获得高纯度的GST-NT21MP蛋白。利用Transwell趋化试验测定GST-NT21MP的活性。结果显示,重组蛋白GST-NT21MP能够抑制乳腺癌细胞SK-BR-3的趋化活性,可作为治疗乳腺癌转移的潜在性靶向药物。
- 杨清玲杨志峰高艳军陈昌杰
- 关键词：CXCR4SDF-1
- 噬菌体抗体库构建和筛选技术及应用研究进展被引量：5
- 2015年
- 噬菌体抗体库技术是由噬菌体展示技术发展而来的一项新型抗体制备技术。通过噬菌体表面表达技术,将抗体分子Fab段基因或Fv基因通过与噬菌体外壳蛋白Ⅲ或蛋白Ⅷ基因连接以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面,从而形成噬菌体抗体。继1988年Parmley等首次阐明噬菌体表面表达技术以来,抗体分子是噬菌体表面表达的第一个具有天然蛋白质功能的蛋白质分子。
- 王志文陈昌杰
- 关键词：噬菌体噬菌体抗体库小分子抗体
- 人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选被引量：1
- 2014年
- 目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织，提取总RNA；构建可变区基因的T载体库，将重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因与pCANTAB连接肽连接，获得pCANTAB-scFv，电转化感受态大肠杆菌TG1；以M13K07辅助噬菌体进行感染，获噬菌体抗体库；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测筛选后获得的噬菌体抗体活性，以免疫组织化学法检测抗体亲和力，并通过测序进一步鉴定。结果：成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库，获得的scFv长度为750bp，VH和VL长度分别为375和330kb；电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确，得到库容为2．48×10^8的大容量抗体库；通过噬菌体展示和淘洗筛选，富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库；所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性，对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力；测序结果与人IgG抗体进行对比，所获得的scFv具有高度的人源性。结论：主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库，并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv，为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体。
- 卢晓辉王志文蔡颖黄静朱丽华杨清玲陈昌杰
- 关键词：基因文库
