天津市科技支撑计划(07SYSYSF05000)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
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- Vegfr2-luc转基因子代小鼠的鉴定
- 2011年
- 背景与目的 Vegfr2-luc转基因小鼠体内血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor recep- tor 2,VEGFR2)的表达可以驱动荧光素酶报告基因(luciferase,luc)的表达,是活体动物水平实时监测血管生成情况的有利工具。本研究旨在对子代Vegfr2-luc转基因小鼠进行鉴定,以确定能否用于血管生成研究。方法 PCR检测新生小鼠基因组内luc基因;利用活体成像技术观察新生Vegfr2-luc转基因小鼠生长发育过程中以及皮肤伤口修复过程中 luc基因表达水平的变化情况;荧光素酶报告基因检测试剂盒检测成年(8周龄)转基因小鼠各脏器荧光素酶的活性和Real-time PCR检测各器官VEGFR2 mRNA的表达水平。结果 PCR结果显示50%(56/112)的新生小鼠携带luc基因。活体成像结果显示随着Vegfr2-luc转基因小鼠发育成熟,luc表达量逐渐降低(P<0.001);在皮肤伤口修复过程中, 伤口处luc表达水平先增强后降低(P<0.001)。雌性成年转基因小鼠各脏器VEGFR2 mRNA的表达水平与荧光素酶活性呈正相关(r=0.948,P<0.001)。将睾丸组织除外,雄性成年转基因小鼠各脏器VEGFR2mRNA的表达水平与荧光素酶活性同样呈正相关(r=0.836,P<0.001)。结论 Vegfr2-luc转基因子代小鼠体内luc表达水平的变化可以反映VEGFR2 的表达情况。
- 王伟强刘红雨宋志涛王玉丽王竞李颖李永文王岷陈军周清华
- 关键词：动物模型血管新生荧光素酶报告基因
- 应用活体内生物发光技术对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981成瘤性和转移性研究被引量：5
- 2008年
- 背景与目的应用阳离子脂质体介导的基因转染方法对nm23-H1缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981进行荧光素酶基因(Luc)标记,建立稳定高效表达荧光素酶(Luciferase)基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-Luc。应用活体生物荧光成像技术,非侵入性地连续检测小鼠(裸鼠和SCID鼠)皮下肿瘤模型发展演进、自发转移的过程。方法将带有荧光素酶基因(Luc)的质粒PGL4.17经阳离子脂质体介导转入人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中,筛选出高效稳定表达荧光素酶的细胞株。将转染后的细胞接种于裸鼠和SCID鼠右后腿腹股沟皮下,建立皮下肿瘤模型,利用活体内可见光成像系统观察其在小鼠体内的生长和转移过程。结果转基因人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-Luc可在体内、外持续稳定表达荧光素酶,细胞数和发光值成直线相关。成功地建立了表达荧光素酶活性的动物肿瘤皮下自发转移模型。L9981-Luc保留了原有的高转移特性。瘤重和发光强度呈直线相关。结论利用活体内生物发光技术可以非侵袭性地连续示踪肿瘤细胞在活体内的生长和转移过程,为研究肺癌侵袭转移过程及其机理和最佳治疗策略的选择提供了新的手段和工具。
- 任苑蓉陈军刘红雨闫慧琴王玉丽刘承飞周清华
- 关键词：肺肿瘤成瘤性生物发光
- 利用单核苷酸多态性芯片全基因组检测人大细胞肺癌细胞株的杂合性缺失和拷贝数变异被引量：1
- 2008年
- 背景和目的DNA序列的杂合性缺失(LOH)和拷贝数变异(CNV)普遍存在于肿瘤基因组,并认为与肿瘤发生发展相关。高密度单核苷酸多态性(SNP)芯片能够检测全基因组的LOH和CNV适用于研究肿瘤遗传变异。本研究运用该技术寻找人大细胞肺癌细胞株NL9980全基因组的LOH和CNV。方法提取细胞株总DNA并应用500K SNP芯片进行检测。芯片获得的500000位点的杂交信号强度数据使用Affymetrix专利软件估算各SNP位点基因型和拷贝数。进一步分析获得NL9980全基因组LOH和CNV。结果芯片的SNP位点检测率超过了93%的主要质控标准。NL9980细胞中LOH散布在所有染色体,CNV主要分布在2,3,4,5,7,10,11和18号等染色体。结论研究表明NL9980基因组存在复杂的遗传变异。SNP芯片高分辨率和提供等位基因型信息等优势极大地提高了肺癌遗传变异研究的能力。
- 胡彬陈军刘红雨吴衡吴志浩王玉丽白云李颖周清华
- 关键词：肺肿瘤单核苷酸多态性杂合性缺失基因芯片
- 硒化合物诱导人高转移大细胞肺癌L9981产生活性氧变化的研究被引量：2
- 2008年
- 背景与目的已有研究表明甲基硒酸具有防癌和抗癌作用。本研究拟探讨甲基硒酸及亚硒酸钠在人高转移大细胞肺癌L9981的代谢过程中是否产生活性氧及其变化,进一步明确氧化应激在不同硒化合物中发挥抗癌效应的地位。方法应用细胞活力计数仪,检测硒化合物对L9981的生长抑制影响;采用活性氧荧光探针羧基-H2DCFDA探测经硒化合物诱导的L9981细胞内活性氧的含量;采用N-乙酰半胱氨酸(NAC)与硒化合物同时处理L9981细胞后,流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。结果①2.5μMMSA即可明显抑制L9981细胞生长,且随浓度增加,效应增强。②甲基硒酸及亚硒酸钠均可诱导L9981产生显著的ROS变化,亚硒酸钠产生时间早于MSA;③采用NAC同时处理L9981后,甲基硒酸能够显著的促进细胞产生活性氧,而亚硒酸钠能够显著的抑制细胞内活性氧的产生。结论①甲基硒酸及亚硒酸钠对L9981均具有抑制生长的作用,并且具有剂量依赖性;②氧化应激反应参与了MSA及亚硒酸钠诱导L9981细胞死亡的过程。
- 刘承飞陈军吴志浩李颖朱彧任宛容周清华
- 关键词：甲基硒酸活性氧
- 陡脉冲不可逆电击穿技术在肿瘤方面的研究进展被引量：2
- 2012年
- 据WHO资料报告,癌症是发病率和死亡率增长最快,对人类健康和生命威胁最大的疾病,外科手术目前仍然是治疗癌症的首选方法。传统的外科手术虽有立竿见影的效果,但无法解决复发和转移问题;放射疗法虽然疗效确切,但特异性较差限制了其广泛应用;化学疗法虽然可对实体瘤和血液系统肿瘤起效,但不良反应较大,容易产生耐药性；
- 宋作庆徐萧洪周清华
- 关键词：肿瘤凋亡
