上海市浦江人才计划项目(13PJ1407300)
- 作品数：11 被引量：32H指数：4
- 相关作者：李冬吴军录权文强万海英姚懿雯更多>>
- 相关机构：同济大学附属同济医院华侨大学上海市普陀区人民医院更多>>
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- 抗菌肽LL-37在巨噬细胞促卵巢癌细胞增殖中的作用被引量：8
- 2013年
- 目的研究抗菌肽LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌细胞增殖中的重要作用。方法采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和卵巢癌细胞株SKOV3、3AO和HO-8910。采用溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）-酶联免疫吸附试验（ELISA）法和细胞计数法检测巨噬细胞对卵巢癌细胞增殖能力的影响。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法检测巨噬细胞和SKOV3细胞中LL．37mRNA和蛋白的表达。应用LL-37中和抗体抑制LL-37的功能活性，观察LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌细胞增殖中的作用e结果细胞计数法检测结果显示，SKOV3细胞与巨噬细胞以1：0．5的比例共培养4d后，SKOV3细胞的数量从（6．0±0．5）×10^4个增加为（11．8±1．3）×10^4个，差异有统计学意义（P〈0．05），并且随着共培养的巨噬细胞比例的增加，SKOV3细胞的数量也随之升高（P〈0．05）。与巨噬细胞共培养后，3AO和HO-8910细胞的数量变化趋势与SKOV3细胞相似。BrdU—ELISA法检测的结果与细胞计数法一致。RT-PCR和Westem blot法检测结果显示，在与卵巢癌SKOV3细胞共培养后，巨噬细胞中LL-37 mRNA和蛋白的表达均上调，且随着时间的延长其表达增加，但其在SKOV3细胞中的表达并未增强。BrdU—ELISA法检测的结果显示，经LL-37处理后，HO-8910和3AO细胞的增殖能力明显增加；但加入LL-37中和抗体后，可明显抑制巨噬细胞对SKOV3、3AO和HO-8910细胞的增殖促进作用，这3株细胞的吸光度分别从2．95±0．11降至1．45±0．04，3．39±0．36降至1．32±0．09，3．93±0．17降至1．68±0．23（均P〈0．05）。结论在与卵巢癌细胞相互作用的条件下，巨噬细胞通过增强抗菌肽LL-37的表达和分泌促进了卵巢癌细胞的增殖。LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌的发展中扮演重要角色。
- 李冬王旋戴燕杨凡万海英
- 关键词：LL-37巨噬细胞卵巢肿瘤肿瘤细胞系细胞增殖
- 抗菌肽hCAP 18／LL-37在卵巢癌微环境中的作用及表达调控机制被引量：9
- 2015年
- 目的：探讨抗菌肽hCAP18／LL-37在卵巢癌微环境中的作用及表达调控机制。方法采用侵袭实验检测巨噬细胞对卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响。采用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）和Western blot检测hCAP18／LL-37和versican V1蛋白的表达。采用干扰质粒抑制 SKOV3细胞中versican V1的表达，分析巨噬细胞hCAP18／LL-37的表达及SKOV3细胞的侵袭能力。结果共培养组（SKOV3细胞与巨噬细胞共培养）的侵袭穿膜数为（112．8±17．1）个，高于SKOV3培养组[SKOV3细胞单独培养，（8．2±1．9）个]，差异有统计学意义（P＜0．05）。 hCAP18／LL-37中和抗体共培养组（SKOV3细胞、巨噬细胞和hCAP18／LL-37中和抗体共培养）的侵袭穿膜细胞数为（22．2±5．6）个，少于对照IgG共培养组[SKOV3细胞、巨噬细胞和对照IgG共培养，（100．6±25．2）个]，差异有统计学意义（P＜0．05）。与SKOV3细胞共培养后，巨噬细胞中 hCAP18／LL-37蛋白和 mRNA水平均升高，而在SKOV3细胞中无变化。与巨噬细胞共培养后，卵巢癌细胞中versican V1蛋白的表达和分泌均升高。干扰卵巢癌SKOV3细胞中versican V1的表达（ SKOV3ver－／－细胞）后，巨噬细胞中hCAP18／LL-37蛋白和mRNA水平均低于对照细胞株（ SKOV3ver＋／＋细胞）；与巨噬细胞共培养后，SKOV3ver－／－细胞的穿膜细胞数[（24．8±4．6）个]低于SKOV3ver＋／＋细胞[（104．6±16．0）个]，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论卵巢癌微环境中，巨噬细胞表达分泌的抗菌肽hCAP18／LL-37促进卵巢癌细胞的侵袭，其表达受到肿瘤细胞分泌的versicanV1蛋白调控。
- 卢茜权文强吴军录张霰马伟庞丽李冬
- 关键词：肿瘤浸润VERSICANV1
- 罗氏LightCycler Nano荧光定量PCR仪性能评价被引量：2
- 2015年
- 目的对美国罗氏公司LightCycler Nano 32孔荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪的主要性能指标进行评价。方法按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)制定的评价标准,评价仪器精密度、准确度、灵敏度、可报告范围、仪器间比对等指标。结果LightCycler Nano精密度批内变异系数(CV)为2.63%、1.51%,批间CV为6.2%、4.15%;准确度与室间质控物比较,5个标本均在靶值区间内;灵敏度检测CV≤10%;可报告范围为最大稀释比例1∶100;与比对仪器的比对结果偏差结果均小于15%。结论罗氏LightCycler Nano荧光定量PCR仪5项性能经验证后与厂家提供的性能参数相符,可以用于临床检测。
- 张宇李冬戴燕郑为超万海英
- 关键词：LIGHTCYCLERNANOPCR性能评价精密度
- 维甲酸诱导基因G慢病毒表达载体的构建及对肺癌细胞A549的影响
- 2015年
- 背景与目的:维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline,DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系,并观察其对A549细胞增殖的作用。方法:采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术扩增RIG-G基因片段,利用LR重组系统构建p Lenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,对该慢病毒载体和Tet-on慢病毒载体包装和病毒滴度测定后,感染A549细胞;采用有限稀释法筛选稳定株;使用细胞免疫荧光和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定RIG-G基因受DOX调控表达的效果;CCK-8试验检测细胞增殖能力。结果:成功构建p Lenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,包装后测得其活性滴度为1.0×108 TU/m L;慢病毒经Tet-on包装后物理滴度为4×109 VP/m L;RIG-G蛋白成功地在慢病毒感染后的A549稳定株中合成和表达,并且受DOX的诱导调控。RIG-G蛋白表达成功后,A549细胞的增殖与对照组相比显著降低(1.168±0.107 vs 2.099±0.162,P<0.05)。结论:本研究成功建立了RIG-G基因可调控表达的A549稳定株;RIG-G蛋白对A549的增殖有抑制作用。
- 吴军录权文强姚懿雯万海英李冬
- 关键词：慢病毒细胞增殖
- 非肿瘤分泌的抗菌肽cathelicidin促进肺癌生长的作用及其机制被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨非肿瘤细胞分泌的抗菌肽cathelicidin促进肺癌生长的作用及其机制.方法 Lewis肺癌细胞（LLCl）通过尾静脉注射入cathelicidin敲除小鼠（CRAMP-/-）和对照小鼠（WT）建立小鼠转移性肺癌模型.对小鼠肺重量及表面肿瘤个数进行评价.利用Kaplan-Meier（K-M）生存率曲线分析小鼠生存率.免疫组织化学方法检测小鼠cathelicidin、肿瘤增殖抗原Ki-67和CD68表达;涂片染色计数肺泡灌洗液中各种炎症细胞个数.结果 Cathlicidin在肿瘤组织的炎症免疫细胞中呈高表达状态,而在肿瘤细胞中表达很弱.CRAMP-/-小鼠的肺重量和肿瘤数分别为（0.25±0.04）g和（9.60±2.25）个,均显著低于WT小鼠的（0.65±0.05）g和（23.40±2.68）个（t=6.07、3.95,均P＜0.05）.K-M生存率分析结果显示,CRAMP-/-小鼠的中位生存时间为49（46 ～51）d,长于Wr小鼠的34（28 ～39） d（x2 =12.00,P＜0.05）,且组织切片中Ki-67阳性肿瘤细胞为（18.80±2.38）％,明显低于WT小鼠的（35.80±2.96）％（=4.48,P＜0.05）.肺泡灌洗液炎症细胞计数显示,CRAMP-/-小鼠的总细胞、中性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞数量分别为（4.72±0.86）×104个、（0.08±0.02）×104个、（0.05±0.02） ×104个和（4.60±0.84）×104个,均低于WT小鼠的（16.18±1.61）×104个、（0.32±0.05）×104个、（0.20±0.05）×104个和（15.66±1.57）×104个（t=6.28、4.39、3.00、6.20,均P＜0.05）,其中以巨噬细胞数量下降最为明显;免疫组织化学检测结果显示,在肿瘤组织中CRAMP-/-小鼠巨噬细胞的数量为（6.77±3.12）个/高倍视野,明显低于WT小鼠的（15.53±2.28）个/高倍视野（t=3.41,P＜0.05）.结论 非肿瘤细胞分泌的cathelicidin具有促进小鼠肿瘤细胞增殖及肿瘤生长的作用,募集炎症细胞如巨噬细胞进入肿瘤微环境可能是其主要作用机制.
- 姚懿雯吴军录权文强万海英李冬
- 关键词：肺癌抗菌肽巨噬细胞
- 慢病毒介导建立可调控表达RIG-G基因的肺癌细胞A549
- 目的:构建维甲酸诱导基因G(RIG-G)慢病毒表达载体,利用Tet-on调控系统建立受强力霉素(DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系,并观察其对A549细胞的作用。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增RIG-G...
- 吴军录权文强姚懿雯万海英李冬
- 关键词：慢病毒细胞增殖
- 文献传递
- CDA-2抑制肺癌生长的炎症机制研究
- 2014年
- 目的探究尿多酸肽(CDA-2)抑制肺癌生长的作用及炎症机制。方法通过给雌性C57BL/6小鼠尾静脉注射LLC细胞,建立小鼠肺癌模型。采用肿瘤计数和测量大小评价CDA-2对肺肿瘤增殖的影响;收集经CDA-2治疗过的小鼠肺支气管肺泡灌洗液(BALF)并分离肺泡巨噬细胞,采用白细胞分类计数、电泳迁移位移试验(EMSA)、ELISA试验,研究CDA-2抑制肿瘤的作用机制。结果与对照相比,CDA-2明显抑制小鼠肺肿瘤的生长,肿瘤数和肿瘤尺寸显著下降(P<0.05)。经CDA-2处理后支气管肺泡灌洗液(BALF)的巨噬细胞中的NF-κB与靶DNA结合的活性被强烈的抑制。此外,CDA-2处理显著减少BALF中各种炎性细胞的数量(P<0.05),以及炎症因子TNFα,IL-6,KC在肺组织中的表达(P<0.05)。结论 CDA-2能抑制肺肿瘤的生长,通过抑制髓系细胞中NF-κB的活性,减少肺部炎症,可能是CDA-2抑制肺癌的生长的机制。
- 权文强吴军录姚懿雯万海英李冬
- 关键词：肺肿瘤NF-ΚB小鼠
- 肿瘤相关巨噬细胞分泌的抗菌肽cathelicidin促进小鼠结直肠癌生长的作用及机制被引量：3
- 2018年
- 目的研究肿瘤相关巨噬细胞分泌的抗菌肽cathelicidin促进小鼠结直肠癌生长的作用及机制。方法通过氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠（AOM/DSS）方法建立小鼠肠炎相关的结直肠癌模型。对诱导成瘤的小鼠，同时每隔3 d注射1次小鼠cathelicidin中和抗体、IgG抗体（阳性对照）和PBS（阴性对照），持续1个月，取小鼠结肠，拍照、计数肿瘤数目并进行评价。利用实时荧光定量PCR和Western blot法检测小鼠结肠肿瘤组织、非肿瘤组织以及组织中巨噬细胞cathelicidin的表达；采用免疫组化法检测小鼠结肠肿瘤组织与非肿瘤组织中的cathelicidin、肿瘤增殖抗原Ki-67和CD68的表达；采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测小鼠结肠肿瘤组织中细胞的凋亡情况。结果cathelicidin在小鼠结肠肿瘤组织的炎症免疫细胞（巨噬细胞）中呈高表达状态，而在肿瘤细胞中表达较弱。注射cathelicidin中和抗体组小鼠的肿瘤数目和长径分别为（4.50±1.18）个和（1.74±0.18）mm，明显低于注射PBS组小鼠的肿瘤数目[（13.88±1.98）个，P〈0. 01]和肿瘤长径[（3.74±0.38）mm，P〈0. 01]；也明显低于注射IgG抗体小鼠的肿瘤数目[（15.25±1.82）个，P〈0. 01]和肿瘤长径[（3.40±0.36）mm，P〈0.01]。注射cathelicidin中和抗体组肿瘤组织中Ki-67阳性肿瘤细胞百分比为（28.20±3.44）%，低于注射PBS组[（68.20±3.51）%，P〈0.01]和注射IgG抗体组[（69.20±3.41）%，P〈0.01]。免疫组织化学染色检测结果显示，注射cathelicidin中和抗体组小鼠组织中CD68的表达明显低于注射IgG抗体组和注射PBS组。TUNEL染色显示，注射cathelicidin中和抗体对肿瘤细胞的凋亡影响不大。结论肿瘤相关巨噬细胞分泌的cathelicidin具有促进小鼠结直肠癌增殖的作用，中和cathelicidin的表达可以抑制结直肠癌的生长和增殖。cathelicidin通过募集炎症细胞（巨噬细胞）进入肿瘤微�
- 权文强潘星昊吴军录姚懿雯李冬
- 关键词：CATHELICIDIN肿瘤相关巨噬细胞
- 抗菌肽LL-37在巨噬细胞促进结直肠癌生长中的作用及其分子机制被引量：2
- 2018年
- 目的研究非肿瘤细胞分泌的抗菌肽LL-37促进结直肠癌生长的作用及分子机制。方法采用Transwell？插入式细胞培养皿模拟肿瘤微环境，共培养人巨噬细胞U937和结直肠癌细胞株SW480和HCT116。采用溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）-酶联免疫吸附（ELISA）法，检测巨噬细胞对结直肠癌细胞增殖能力的影响。采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测巨噬细胞和结直肠癌细胞中LL-37 mRNA和蛋白的表达。应用LL-37中和抗体抑制LL-37的功能活性或转染LL-37 shRNA质粒，观察巨噬细胞分泌的LL-37在促进结直肠癌细胞增殖中的作用，并以Western blot法检测结直肠癌增殖相关信号通路的激活情况。结果BrdU-ELISA法检测结果显示，共培养前后，SW480细胞的吸光度（A）值分别为1.072±0.097和5.121±0.407，差异有统计学意义（P〈0.001）；HCT116细胞的A值分别为1.229±0.073和3.495±0.228，差异有统计学意义（P〈0.001）。实时荧光定量PCR检测结果显示，共培养前后，巨噬细胞中LL-37 mRNA的相对表达量分别为2.682±0.191和6.117±0.768，差异有统计学意义（P〈0.05）；SW480细胞中LL-37 mRNA的相对表达量分别为1.012±0.069和1.112±0.110，差异无统计学意义（P〉0.05）。Western blot法检测结果显示，巨噬细胞中LL-37蛋白的表达明显增高，而结直肠癌SW480细胞中LL-37蛋白的表达没有变化。加入LL-37中和抗体后，SW480细胞的增殖速度有所减缓；而转染LL-37 shRNA质粒后的巨噬细胞与SW480细胞共培养时，SW480细胞增殖速度也明显减慢。Western blot检测结果显示，共培养时SW480细胞中非磷酸化的β-catenin表达明显增高，其下游转录基因cyclin D1、c-myc的表达也明显增高。加入LL-37中和抗体后，非磷酸化的β-catenin表达受到抑制，cyclin D1、c-myc的表达也明显降低。结论在体外模拟肿瘤微环境共培养时，巨噬细胞通过增强抗菌肽LL-37的表达和分泌促
- 潘星昊权文强吴军录肖卫东孙祖俊李冬
- 关键词：结直肠肿瘤LL-37共培养WNT/Β-CATENIN信号通路
- 髓系ReIA/p65介导的香烟促小鼠肺癌生长机制研究
- 目的:研究香烟促进小鼠肺癌生长的作用机制。方法:使用髓系细胞RelA/p65敲除小鼠(RelA/p65~(-/-))和对照小鼠(WT),利用尾静脉注射小鼠肺肿瘤细胞LLC细胞方法建立小鼠转移性肺癌模型,然后将小鼠暴露于香...
- 姚懿雯吴军录权文强周宏张宇万海英李冬
- 关键词：肺癌肿瘤生长炎症因子
- 文献传递
