青岛市科技发展计划项目(08-1-3-30-jch)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
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- 人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响被引量：2
- 2010年
- 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达。采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达。流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P(0.05。瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系。
- 刘海燕王斌李玲白志强姜光域王海涛钱冬萌赵巍闫志勇丁守怡宋旭霞
- 关键词：人巨细胞病毒ARPE-19细胞周期
- HSV-1感染对人星形胶质瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:研究单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus,HSV-1)感染对人星形胶质瘤细胞U251增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以感染复数(MOI)为5的HSV-1感染体外培养的U251细胞,在感染后24h、48h、72h和96h用倒置显微镜观察U251细胞的形态改变;用MTT法、流式细胞术观察HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:U251细胞在感染24h后开始出现细胞融合,48h后开始出现典型的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),72h后超过80%的细胞出现CPE,。96h后细胞大部分死亡。②MTT法显示HSV-1感染U251细胞24h、48h、72h及96h的U251细胞OD值均低于对照组(P<0.05)。③HSV-1感染U251细胞12h后凋亡率与对照组无显著差异(P>0.05),感染24h和36h后凋亡率比相应对照组有显著差别(p<0.05)。④HSV感染12h、24h和36h后均可引起U251细胞S期细胞增多和G0/G1期细胞减少,24h后G2/M期细胞比例开始增加。结论:HSV-1能感染体外培养的U251细胞,抑制其增殖,促进其凋亡并影响其细胞周期。
- 王倩李玲于向民王斌白志强钱冬萌宋旭霞赵巍丁守怡
- 关键词：HSV-1U251凋亡细胞周期
- 人巨细胞病毒感染对人神经干细胞定向星形胶质细胞分化过程中Notch相关信号分子表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染可抑制神经干细胞（neural stem cell,NSC）的增殖和分化,Notch信号对NSC的增殖和分化具有重要的调控功能。文中研究HCMV感染对人NSC向星形胶质细胞分化过程中Notch信号相关分子Notch1~3、Jagged（JAG）1、delta-like（DLL）1及早老素（presenilin,PS）1表达的影响。方法体外分离培养海马NSC,并诱导其向星形胶质细胞分化。同时以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为5的HCMV AD169株感染NSC,分别在感染后0、1、3、5、7 d收获细胞,用实时RT-PCR法检测细胞内Notch1-3及其受体JAG1、DLL1的转录水平,Westernblot法检测Notch1细胞内段（Notch 1 intracellular domain,NICD）含量的变化。结果未分化状态的NSC含有大量Notch1NICD,Notch1-3、JAG1、DLL1mRNA呈高表达。诱导分化1d后,Notch各受体、配体mRNA表达均显著下降,3 d后表达回升,至第7天显著升高且可检出大量激活的NICD。HCMV感染组细胞在诱导分化1 d后Notch相关受体、配体mRNA水平亦明显下降,与对照组相比Notch1、Notch2和DLL1的表达更少。在以后各个时间点Notch相关受体、配体mRNA水平均低于对照组。PS1的表达仅在1 d时低于对照组。病毒感染7 d后,细胞内NICD含量明显低于对照组。结论HCMV感染可抑制Notch相关受体、配体的表达与活化,Notch信号异常表达参与HCMV感染所致NSC分化和增殖异常。
- 李玲白志强李鹏刘志军王海涛刘海燕姜光域宋旭霞钱冬萌闫志勇丁守怡王斌
- 关键词：神经干细胞人巨细胞病毒
- 人巨细胞病毒诱导分化中的神经干细胞分泌神经生长因子前体被引量：4
- 2010年
- 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提供理论依据。方法体外培养人海马NSC,感染组以感染复数(multiplicity of infectin,MOI)为5的HCMVAD169株感染NSC,对照组只加入与病毒悬液等体积的培养液,在感染病毒的同时,诱导感染组和对照组NSC向星形胶质细胞分化,分别在感染后0、1、3、5、7、9 d收获细胞,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot方法检测细胞内NGF及其受体p75NTR、trkA的转录水平和蛋白表达水平。结果对照组NSC不表达NGF及其受体P75NTR和trkA。感染组细胞在第3天开始出现NGFmRNA的表达,第5天出现P75NTRmRNA的表达,且其表达强度随时间增强;第5天出现相对分子质量为40000和100000NGF前体蛋白(ProNGF)和P75NTR蛋白,随时间延长,表达强度升高。免疫荧光检测显示,NGF前体蛋白位于细胞的细胞质;整个感染过程中未检测到trkA的表达。结论 HCMV感染可诱导向星形胶质细胞分化的海马NSC分泌NGF前体蛋白及其受体p75NTR。
- 李玲王斌白志强李鹏王海涛刘海燕姜光域宋旭霞钱冬萌闫志勇丁守怡
- 关键词：人巨细胞病毒神经生长因子P75NTR
- HCMV IE86对ARPE-19细胞周期的影响
- 2009年
- 目的:构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,瞬时转染ARPE-19细胞,探讨其对视网膜色素上皮细胞周期的影响。方法:采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,将其定向克隆于pEGFP-N3,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,酶切、测序鉴定,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因在mRNA和蛋白水平的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果:成功构建重组质粒pEGFP-N3-IE2,并在被转染细胞中检测到IE2基因的表达;瞬时转染后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论:成功构建pEGFP-N3-IE2真核表达质粒,重组质粒能在ARPE-19细胞中顺利表达IE2,IE2基因可以引起ARPE-19细胞的细胞周期S期阻滞。
- 刘海燕李玲白志强王斌钱冬萌丁守怡宋旭霞赵巍闫志勇苏洁杨丽
- 关键词：HCMVARPE-19细胞周期
- HCMV感染抑制人海马神经干细胞分化被引量：2
- 2009年
- 研究HCMV感染对体外培养的人海马源性神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)分化的影响。体外分离、培养人海马NSCs,应用免疫荧光方法检测其NSCs标记物-巢蛋白(Nestin)的表达。10%胎牛血清诱导NSCs贴壁分化,同时用MOI为5的HCMV AD169株感染NSCs,7d后使用激光共聚焦显微镜免疫荧光方法检测Nestin、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和HCMV即刻早期蛋白(IE)的表达,计算阳性细胞比率。本实验所培养的细胞(4～6代)95±8%表达Nestin;分化诱导7d后,感染组86±12%细胞表达IE,未感染组和感染组Nestin阳性率分别为50±19%和93±10%(t=6.03,P<0.01),GFAP阳性细胞率分别为81±11%和55±17%(t=3.77,P<0.01)。以上结果表明分化过程中的NSCs是HCMV的容许细胞;HCMV感染可以抑制NSCs的分化。
- 李玲王斌李鹏白志强王海涛宋旭霞丁守怡
- 关键词：人巨细胞病毒神经干细胞海马细胞分化巢蛋白
- 染料木黄酮抑制由单纯疱疹病毒1型感染导致的人胶质瘤细胞增殖和凋亡异常被引量：1
- 2011年
- 目的染料木黄酮(Genistein,GST)已被证实具有抗广谱病毒的作用,但有关其抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpessimplex virus-1,HSV-1)感染人星形胶质细胞的研究鲜有报道。研究GST对由HSV感染所致人胶质瘤细胞(U251)增殖和凋亡异常的抑制作用。方法设立GST组、GST+HSV-1组、HSV-1组和对照组,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5的HSV-1感染U251细胞,通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和RT-PCR检测GST对HSV-1感染致U251细胞增殖和凋亡异常的抑制作用。结果①MTT法显示不同处理组之间的差别具有高度统计学意义(P<0.05),并有非常明显的时间效应(P<0.05)。其中30μg/ml GST组和HSV-1组MTT值低于对照组(P<0.05);15μg/ml GST+HSV-1组MTT均值高于HSV-1组均值(P<0.05),3.75和30μg/ml GST+HSV-1组MTT值均低于HSV-1组(P<0.05)。②形态学观察HSV-1组细胞感染12 h后出现融合,36 h后出现细胞病变效应,15μg/ml GST+HSV-1组细胞感染24 h后开始出现少量融合,36 h后融合增多,但大部分细胞为正常形态;流式细胞术显示,15μg/ml GST+HSV-1组凋亡率低于HSV-1组(P<0.05)。③RT-PCR检测显示HSV-1组感染6 h后开始检测到gD基因的表达;15μg/ml GST+HSV-1组在感染12 h内gD基因表达受到抑制,24 h后gD基因才开始表达。结论 15μg/ml浓度的GST能抑制HSV-1感染所致细胞增殖和凋亡的异常,同时抑制病毒gD基因的表达。
- 王倩李玲王斌于向民宋旭霞钱冬萌侯云姜光域胡明
- 关键词：染料木黄酮单纯疱疹病毒1型U251增殖凋亡
