教育部留学回国人员科研启动基金(J20040141)
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- 大肠杆菌T蛋白的聚合状态分析
- 2006年
- 目的解析大肠杆菌T蛋白的四级结构。方法利用分段克隆法克隆表达了T蛋白及其两个独立结构域分支酸变位酶(CM,T/1-94)和预苯酸脱氢酶(PDH,T/93-373),再利用SDS-PAGE测得变性条件下T蛋白、CM和PDH的Mr分别为42×103,11×103和32×103,HPLC测得天然条件下CM和PDH的Mr分别为25×103和63×103,再用化学交联法分析聚合状态。结果显示T蛋白、独立结构域CM和PDH均为二聚体。结论说明大肠杆菌T蛋白二聚体是通过CM与CM、PDH与PDH相连的。
- 王光柱丁丁孙红颖陈枢青
- 大肠杆菌P蛋白和T蛋白的调节结构域互换研究(英文)
- 2006年
- 在细菌、真菌及植物中,分支酸是一种位于关键分叉点上的中间代谢物,是所有芳香族氨基酸合成的共同前体.它可在双功能酶分支酸变位酶(CM)和预苯酸脱水酶(PDT)的催化下合成苯丙氨酸,在另一个双功能酶分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶(PDH)的催化下合成酪氨酸.前者被称为P蛋白,后者被称为T蛋白.大肠杆菌P蛋白和T蛋白有着类似的结构,P蛋白由CMp、PDT和调节结构域3个独立结构域组成,其变构调节因子是苯丙氨酸.T蛋白只有CMt和PDH两个独立结构域组成,起变构调节作用的调节结构域与PDH密不可分,其变构调节因子是酪氨酸.为了研究P蛋白和T蛋白的调节结构域的变构调节作用,应用融合蛋白技术将P蛋白和T蛋白的调节结构域进行了互换.结果发现,互换了的调节结构域仍然具有变构调节作用,而且调节结构域的互换导致了变构调节因子的互换,说明调节结构域对酶活性的调节作用是非专一的,而其R结构域与调节因子的结合却是专一的.
- 薛乔孙红颖应跃斌陈枢青
- 关键词：大肠杆菌
- 大肠杆菌T蛋白的聚合状态分析
- 2006年
- 目的 解析大肠杆菌T蛋白的四级结构。方法 利用分段克隆法克隆表达了T蛋白及其两个独立结构域分支酸变位酶（CM，T/1-94）和预苯酸脱氢酶（PDH，T／93-373），再利用SDS-PAGE测得变性条件下T蛋白、CM和PDH的M。分别为42×103，11×103和32×103，HPLC测得天然条件下CM和PDH的M。分别为25×103和63×103，再用化学交联法分析聚合状态。结果 T蛋白、独立结构域CM和PDH均为二聚体。结论 说明大肠杆菌T蛋白二聚体是通过CM与CM、PDH与PDH相连的。
- 王光柱丁丁孙红颖陈枢青
- 基于结构域活性分析的大肠杆菌T蛋白结构研究
- 2006年
- 大肠杆菌T蛋白含有三个结构域:分支酸变位酶、预苯酸脱氢酶和调节结构域。文章作者分段克隆了T蛋白的分支酸变位酶、预苯酸脱氢酶和调节结构域等片段,并对其进行了活性研究。研究发现,定位于N末端的分支酸变位酶结构域的比活性虽然不高,而稳定性较好;同时拥有调节结构域和预苯酸脱氢酶结构域的C末端片段,其预苯酸脱氢酶比活性的剩余百分率虽然高于分支酸变位酶结构域,但稳定性较差。作者进而表达了C末端切除38个氨基酸的T/1-336片段,发现预苯酸脱氢酶活性彻底丧失,而其分支酸变位酶和调节结构域的活性却基本保留。这说明T蛋白中分支酸变位酶结构域拥有一个相对独立、完整的结构,而预苯酸脱氢酶结构域和调节结构域交织共存,结构松散。
- 应跃斌宋见惠黄鹏陈枢青
- 关键词：大肠杆菌
