国家自然科学基金(30270073)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
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- 单核细胞增多性李斯特菌牛奶分离株弱毒的分子基础
- 为探讨单核细胞增多性李斯特菌H4株弱毒的分子基础,我们在分析其表型的基础上,对其主要毒力相关基因进行了系统测序和分析。体外试验表明:分离株H4与10403S菌株相比具有相似的溶血活性和细胞侵袭力,但具有更强的细胞黏附力、...
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- 文献传递
- 携带新城疫病毒融合蛋白基因的重组减毒单核细胞增多性李斯特菌构建与鉴定被引量：4
- 2006年
- 以鸡新城疫病毒F基因(NDV-F)为模式外源基因,通过基因切割-重叠延伸PCR法(SOE-PCR)将其插入到单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)毒力基因hly的启动子和信号肽序列下游,并将该融合片段克隆入穿梭质粒pKSV7,随后将重组质粒电转李斯特菌进行同源重组。NDV-F基因的PCR扩增表明该重组菌构建成功,RT-PCR结果表明F基因在重组菌中得到了转录。比较了重组菌和野生型菌株的溶血性、黏附和侵袭力、对小鼠和鸡胚的毒力和生长特性以及重组菌的体内外稳定性,结果表明:hly基因中F片段的整合消除了单核细胞增多性李斯特菌溶血素基因的表达,其培养上清液没有溶血性,而野生型菌株的溶血价达24;细胞试验表明重组菌对细胞的黏附力和相对侵袭力均有不同程度的降低,而相对侵袭力与野生型菌株具有显著性差异(P<0.05);重组菌对小鼠及鸡胚的毒力(LD50)与野生型相比分别下降3.7和6.5个对数数量级;重组菌在BHI肉汤和小鼠体内连续5次后,仍然可以扩增出目的基因NDV-F,初步表明该重组菌较为稳定。
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- 关键词：同源重组插入突变
