甘肃省自然科学基金(ZS001-A23-058-Y)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 胶原沉积抑制因子在肝纤维化中的作用
- 2007年
- 目的研究乙型肝炎肝组织中胶原沉积抑制因子(decorin)的表达及其与肝纤维化发生的关系。方法用原位杂交法检测55例乙型肝炎患者石蜡包埋肝组织中decorin mRNA的分布和强度。结果decorin mRNA主要分布于肝细胞和纤维细胞胞质。纤维细胞decorin表达阳性率和阳性强度S3期明显高于S0期(P<0.05)。结论decorin在肝纤维化发生发展中具有重要作用;纤维细胞decorin的高表达可成为肝纤维化是否可逆以及肝硬化是否发生的预后指标。
- 杨国嵘薛永杰贾兴民何晓霞贺雪姣郁荣
- 关键词：肝纤维化乙型肝炎
- 胶原沉积抑制因子cDNA的分子克隆及其在大肠杆菌DH5α的表达被引量：3
- 2005年
- 目的:获取胶原沉积抑制因子(Decorin)互补脱氧核糖核酸(cDNA)并在大肠杆菌DH5α中表达出成熟蛋白。方法:用巢式逆转录聚合酶链反应(nest-RT-PCR)法从体外培养的成纤维细胞(2BS)中获取Decorin cDNA,克隆入pMD18-T载体。测序后,将成熟蛋白区亚克隆入pGEX-4T-1中,用PCR法、限制性酶切和测序对融合克隆进行鉴定。经过鉴定的融合克隆在大肠杆菌DH5α中进行表达。结果:获取的1 181 bp的Decorin cDNA片段与基因bank中收录的序列相似性达99.75%;可从GST-Decorin成熟蛋白cDNA融合克隆中扩增出和酶切出1 005 bp的目的片段;融合克隆有完整的开放阅读框架;融合蛋白在大肠杆菌DH5α中成功表达。结论:获取了Decorin cDNA并在大肠杆菌DH5α中表达出GST-Decorin成熟蛋白。
- 杨国嵘朱任之何晓霞薛永杰贺雪姣郁荣
- 关键词：克隆原核表达
- 胶原沉积抑制因子在大肠杆菌DH5α中的表达特性被引量：2
- 2007年
- 目的:研究人胶原沉积抑制因子(decorin)在大肠杆菌DH5α中的表达特性。方法:用SDS-PAGE法检测pGEX-4T-1-decorin融合克隆在大肠杆菌DH5α中表达,选择阳性表达克隆;测定1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)最佳诱导时间;用超声波裂解法分析GST-decorin融合蛋白的可溶性。用West-ern blotting进行定性分析。结果:用1mmol/LIPTG诱导时,融合蛋白可在大肠杆菌DH5α中表达;最佳诱导时间为4h;大部分融合蛋白以包涵体的形式存在;所表达蛋白为GST融合蛋白。结论:GST-decorin融合蛋白可在大肠杆菌DH5α中大量表达,但以包涵体的形式存在。
- 杨国嵘朱任之何晓霞薛永杰贺雪姣郁荣
- 关键词：DECORIN融合蛋白质类原核表达
- Decorin cDNA探针的制备及组织中decorin mRNA的初步检测被引量：1
- 2006年
- 目的:制备胶原沉积抑制因子(decorin)cDNA探针并初步检测组织中decorin mRNA。方法:用聚合酶链反应(PCR)法将地高辛掺入decorin cDNA片段;琼脂糖凝胶电泳观察地高辛掺入对decorin cDNA片段分子量的影响;乙醇沉淀法纯化探针、紫外分光光度法测定探针含量;斑点杂交法检测探针的灵敏度和特异性;原位杂交法检测石蜡包埋组织中decorin mRNA。结果:成功获得了地高辛标记decorin cDNA探针,但掺入D IG后使得同一decorin片段分子量增大;一次100μl PCR可产生11μg标记探针;探针的灵敏度为19 pg;探针的特异性因待测分子中decorin片段的比例而不同,当以1 005 bp的decorin片段和pGEX-3X-decorin为待测基因时,特异性分别为2和20 pg;标记探针可显示不同组织中decorin mRNA。结论:用PCR法高效地制备了灵敏度和特异性都很高的地高辛标记decorin cDNA探针,并成功地检测了不同组织中decorin mRNA水平。
- 杨国嵘朱任之何晓霞薛永杰贺雪姣郁荣
- 关键词：探针聚合酶链反应
