国家自然科学基金(31370590)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 油松端粒酶活性的测定方法
- 2014年
- 端粒酶具有修复延伸端粒的功能,对于维持真核生物染色体的完整性至关重要,因此对其活性的测定有着重要意义。通过大量的摸索实验,将常用于动物细胞端粒酶活性检测的端粒末端重复序列扩增法(TRAP法)运用到对植物材料的检测中来,对北方常见木本植物油松进行了端粒酶活性测定。基于TRAP法的原理,对体外延伸、引物选择、退火温度、电泳检测等实验条件进行优化。结果表明,油松端粒酶活性测定的最佳体外延伸条件为30℃延伸1 h,最适前导链引物和反向引物分别为TS21和ACX,PCR退火温度为61.8℃,电泳检测使用Gene Finder核酸染料染色效果更好,建立了一种有效测定木本植物油松松针叶端粒酶活性的测定方法。
- 任兰芳慕莹荀志丽胡旭东要笑云陆海李凤兰刘頔
- 关键词：油松端粒酶TRAP法
- 油松合子胚愈伤组织诱导和悬浮细胞系的建立被引量：1
- 2018年
- 松属植物的离体培养一直是国内外的研究重点,油松(Pinus tabuliformis Carr)是我国特有的常绿裸子植物,具有丰富的经济价值。本研究以油松合子胚为研究对象,通过组织培养诱导出愈伤,多次继代得到稳定增殖的愈伤组织,继而液体培养得到油松悬浮细胞。结果表明,油松在DCR培养基上诱导愈伤组织效果较好,使用激素浓度为2.0 mg/L 2,4-D+ 0.63 mg/L 6-BA + 0.61 mg/L KT + 0.1 μM BR的培养基诱导率可达82.9%;继代培养基为DCR + 1.1 mg/L 2,4-D + 0.45 mg/L 6-BA + 0.43 mg/L KT,固体继代获得稳定增殖的愈伤,液体培养得到油松悬浮细胞系。该方法可以为油松的遗传转化研究提供材料,也为今后油松的组织培养再生成苗提供思路。
- 滕晓曈李嘉鑫李盈程子义尹玢张永卓李慧陆海刘頔
- 关键词：油松合子胚悬浮细胞
- 植物端粒蛋白TRB的研究进展
- 2022年
- 端粒是真核生物染色体物理末端的非转录重复序列(TTAGGG)n及一些结合蛋白组成的特殊结构,在染色体复制、末端保护和细胞寿命等方面具有重要作用。TRB(telomere repeat binding)是一类端粒双链DNA结合蛋白,其关键DNA结合结构域位于N端的Myb结构域。TRB蛋白可以与端粒相关蛋白POT1b(protection of telomeres 1b)、TERT(telomerase reverse transcriptase)等互作,具有调节端粒长度、募集相关因子、影响端粒酶活性等端粒功能。TRB蛋白还可以与非端粒蛋白CHR19(chromatin remodeling protein 19)、HDT4(histone deacetylase 4)、HDA6(histone deacetylase 6)、CLF(curly leaf)、SWN(swinger)等互作,TRB通过与telobox相关基序结合参与转录调控,具有非端粒功能。本文介绍了植物TRB蛋白的主要结构,概述了其端粒与非端粒功能,构建了TRB蛋白功能网络,为丰富TRB蛋白多功能网络机制研究提供了参考。
- 邹伊荣骆梅王馨李慧陆海刘迪
- 关键词：端粒植物
- 利用酵母单杂交文库技术筛选银杏端粒结合蛋白
- 2016年
- 目的:为了获得与银杏端粒结合序列相结合的端粒结合蛋白,为木本植物端粒结合蛋白的研究提供实验依据,从而丰富对银杏端粒的研究。方法:以银杏叶片为实验材料,利用酵母单杂交文库筛选获得可能为银杏端粒结合蛋白的基因片段,并通过GFP酵母单杂交实验验证获得基因片段与端粒序列的结合特异性。结果:使用端粒特异性结合序列(TTTAGGG)3的诱饵载体没有获得合适大小的扩增片段,而使用端粒特异性结合序列(TTTAGGG)5的诱饵载体成功获得52个扩增片段,这说明端粒DNA序列(TTTAGGG)3过短,不利用蛋白质的结合。比较这些扩增片段序列并去除相同序列,结果显示这52个扩增片段分别属于10个基因片段。对这10个基因片段进行进一步序列分析,并使用酵母单杂交技术验证,结果显示其中一个基因能够与银杏端粒序列特异性结合。结论:本研究通过酵母单杂交文库筛选,GFP酵母单杂交验证等实验方法建立了银杏端粒结合蛋白的筛选方法,并成功获得了一个和银杏端粒重复序列特异性结合的端粒结合蛋白。
- 蒋璐瑶李丽红要笑云张强撖静宜王莹李慧陆海刘頔
- 关键词：银杏端粒结合蛋白酵母单杂交
