国家自然科学基金(30871033)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第一医院广州医学院第二附属医院广州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省卫生厅资助课题更多>>
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- Numb基因在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨Numb在大鼠。肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。方法重组人转化生长因子p1（TGF-β1）刺激大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E细胞），不同浓度TGF-β1（0、1、5、10、15、20μg/L）作用48h与TGF-β110μg/L作用不同时间（0、24、48、72h）后，采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白（E—cadhefin）、仅平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Numb的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达，Western印迹观察改变Numb水平对E—cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。结果TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E—cadhefin蛋白表达下调，α-SMA蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高，在5、10、15和20μg/L时分别为0μg/L时的1．33倍（P=0．024）、1．39倍（P=0．035）、1．45倍（P=0．025）和1．51倍（P：0．000）。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF—β1作用时间的延长而增高，作用24h、48h、72h，Numb蛋白分别为0h的1．48倍（P=0．046）、1．54倍（P=0．011）、1．79倍（P=0．028），NumbmRNA分别为0h的1．56倍（P=0．012）、1．82倍（P=0．008）、1．82倍（P=0．002）；同时Numb的分布也发生了改变，大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的d，SMA表达上调（为Numb表达正常时的18．1％，P=0．004）、E—cadhefin表达下调（为Numb表达正常时的2．19倍，P=0．004）。结诊Numb可以佴讲肾小管卜席绷朐岢牮转分化。
- 刘伟朱风新聂静范瑾瑾邱芳华陈文芳黄锋先余学清
- 关键词：转化生长因子Β1肾小管上皮细胞NUMB上皮细胞转分化
- 双向凝胶电泳分析脾脏蛋白组学的方法研究被引量：3
- 2011年
- 目的优化双向凝胶电泳的实验步骤,总结一套适用脾脏组织的双向凝胶电泳技术。方法对双向电泳实验中的关键环节:蛋白沉淀方法;胶条PH的选择;聚焦条件等进行研究与优化,考马斯亮蓝染色后进行凝胶图像比较。结果 Cleaning up沉淀蛋白,聚焦电压达到11 000伏小时(110k vhs),可以得到多达1000个蛋白点的2D gel(two-dimensional polyacrylamide gel)。结论建立了脾脏双向电泳的具体方法,得到分辨率高重复性好的2D gel,为脾脏的蛋白质组学研究奠定了基础。
- 邱芳华饶卫农周强陈求刚肖洪广
- 关键词：脾脏蛋白质组学双向电泳
- 原发性肝癌组织双向电泳技术优化被引量：2
- 2010年
- 【目的】优化双向凝胶电泳的实验步骤,总结出一套适用于原发性肝癌组织的双向凝胶电泳技术。【方法】对双向电泳实验中的关键环节:样本处理、上样方法、聚焦条件等进行研究与优化,考马斯亮蓝染色后进行凝胶图像比较。【结果】采用7mmol/L尿素、2mol/L硫脲、40g/LCHAPS、100mmol/LDTT、5g/L(pH3-10)IPGbuffer,1mmol/LPMSF作为裂解液,丙酮沉淀蛋白,主动水化上样法,聚焦电压达到140kV可以得到分辨率高、重复性好的结果。【结论】上述改良提高了2-D图谱中蛋白位点的分辨率和重复性,为原发性肝癌组织的蛋白质组学研究奠定了基础。
- 邱芳华聂静沈顺利
- 关键词：原发性肝癌蛋白质组学双向电泳
