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上海市自然科学基金(034119827)
作品数:
2
被引量:3
H指数:1
相关作者:
经纬
张军
毕建威
李闻捷
魏国
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相关机构:
第二军医大学
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发文基金:
上海市自然科学基金
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相关领域:
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张军
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第二军医大学...
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1篇
2006
1篇
2005
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RT-PCR检测外周血中CK19 mRNA方法的优化
被引量:1
2005年
目的:探讨应用RT PCR技术检测CK19 mRNA的优化方法。方法:采用RT PCR方法分别检测经病理确诊的胃癌组织及有明确肿瘤病灶的胃癌患者和健康对照者外周血中CK19 mRNA的表达。结果:通过设计多对引物进行对比及设立未经逆转录的RNA为模板的对照可观察到CK19假基因及基因组DNA的干扰现象。在合理设计错配引物的基础上选择合适的退火温度可消除干扰。结论:在运用RT PCR法检测外周血中CK19 mRNA表达时常存在基因组及假基因等因素的干扰,通过本方法可有效地克服这种干扰作用。
毕建威
经纬
张军
李闻捷
关键词:
胃肿瘤
微转移
RT-PCR
TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测外周血CK19 mRNA
被引量:2
2006年
目的:应用TaqM an实时荧光定量RT-PCR技术,建立定量检测CK19 mRNA的方法。方法:采用RT-PCR从胃癌细胞中克隆CK19片段(230 bp),装入pMD 18-T S imp le载体。纯化质粒,制备荧光定量PCR标准品。应用L ightCyc le荧光定量PCR仪检测标准品、30例正常人外周血和5例肿瘤组织CK19 mRNA。结果:PCR扩增及测序均证实CK19 cDNA片段重组到pMD 18-T载体上,建立了稳定的检测CK19 mRNA的标准,即设定CT值在35个循环之内,检测结果低于100个拷贝数量级为阴性标本。结论:采用TaqM an实时荧光定量RT-PCR技术检测外周血CK19 mRNA是一种稳定可靠的方法。
经纬
毕建威
张军
魏国
李闻捷
关键词:
CK19
实时荧光定量PCR
TAQMAN
胃肿瘤
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