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安小平
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- 所属机构:军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
- 所在地区:北京市
- 研究方向:生物学
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 童贻刚

- 作品数:178被引量:581H指数:12
- 供职机构:军事医学科学院微生物流行病研究所
- 研究主题:噬菌体 高通量测序 CHO细胞 基因 全基因组测序
- 米志强

- 作品数:102被引量:230H指数:10
- 供职机构:军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
- 研究主题:新城疫病毒 噬菌体 新城疫病毒HN基因 HN基因 高通量测序
- 张昕

- 作品数:25被引量:38H指数:3
- 供职机构:军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题:细胞模型 药物筛选 报告基因 重组慢病毒 聚合酶链反应
- 刘大斌

- 作品数:22被引量:36H指数:4
- 供职机构:军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
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- 张宝中

- 作品数:21被引量:48H指数:4
- 供职机构:军事医学科学院微生物流行病研究所
- 研究主题:基因 定点突变 酶切 大容量 CHO细胞
- 利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平被引量:3
- 2011年
- 目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后,结果检测不到报告基因的表达。为了提高报告基因的表达水平,将报告基因的读码框向后移动一个碱基,同时在其上游增加一个终止密码子,然后检测报告基因的表达水平。结果:通过移动报告基因的读码框同时在上游增加终止密码子,使报告基因的表达水平大大提高。结论:在构建基因表达载体时,通过改变目的基因与上游起始密码子ATG之间的相对位置以及增加终止密码子,可以大幅提高目的基因的表达水平。
- 陈斌李建彬米志强安小平李存刘大斌姜焕焕王娟黄芬张宝中范华昊何后军童贻刚
- 关键词:慢病毒载体报告基因基因表达定点突变
- 抗H5N1病毒人源化分泌型IgA抗体的研制
- 米志强童贻刚李存安小平张宝中
- 抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在中国仓鼠卵巢细胞中的表达被引量:1
- 2011年
- 分泌型IgA(SIgA)在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系为基础,共转染分泌片和J链表达质粒,然后用抗生素Zeocin选择阳性克隆细胞,利用倍比稀释的方法筛选分泌SIgA的单克隆细胞,通过Western blotting分析培养上清中SIgA的表达情况。结果表明,在CHO细胞中成功表达了SIgA抗体,上述研究为研制分泌型IgA抗体制剂奠定了良好的基础。
- 李存张宝中安小平米志强刘大斌姜焕焕潘博王盛陈斌黄芬王娟王晓娜童贻刚
- 关键词:WESTERNBLOTTING
- 一种检测炭疽芽孢杆菌的方法
- 本发明公开了一种检测炭疽芽孢杆菌的方法。本发明提供了一种用于定量检测蜡样芽孢杆菌RSVF1的试剂盒,包括PlyG蛋白;所述试剂盒的用途为如下(a)或(b):(a)定量检测蜡样芽孢杆菌RSVF1;(b)定量检测炭疽芽孢杆菌...
- 张博米志强安小平张飞雄童贻刚
- 文献传递
- 从大容量噬菌体抗体库中筛选抗Acr蛋白人源单链抗体
- 2012年
- 目的:从天然的大容量噬菌体抗体库中筛选特异的抗结核分枝杆菌晶体蛋白(alpha-crystallin Acr)的人源抗体。方法:以结核分枝杆菌Acr蛋白包被免疫管,通过对噬菌体抗体库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的过程从大容量抗体库中筛选特异性抗结核分枝杆菌Acr蛋白的抗体,并对可变区序列进行了测序分析。将特异性的噬菌体抗体感染HB2151菌,经IPTG诱导表达,制备了抗结核分枝杆菌Acr蛋白的可溶性单链抗体;对其序列和抗原结合活性进行分析鉴定。结果:经过4轮筛选,获得了43个与结核分枝杆菌Acr蛋白结合的阳性克隆,其中29个特异结合的克隆;测序分析有26不同的可变区片段;通过可溶性单链抗体(scFv)表达筛选到14株特异性结合Acr蛋白的可溶性单链抗体克隆;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群。成功制备了可溶性单链抗体。Westren blotting分析证实筛选的人源单链抗体能与天然蛋白结合。结论:利用单链大容量抗体库获得抗结核分枝杆菌Acr蛋白的噬菌体抗体并且成功制备抗结核分枝杆菌Acr天然蛋白的可溶性单链抗体,为今后的研究和应用奠定基础。
- 王晓娜米志强安小平李建彬范华昊张文慧张博黄勇周丽君童贻刚
- 关键词:ACR蛋白噬菌体抗体库单链抗体
- 利用比较基因组学快速鉴定大肠埃希菌噬菌体耐受基因
- 2017年
- 噬菌体是解决致病菌多重耐药性问题的最佳选择之一,然而噬菌体的宿主特异性使得噬菌体的裂解谱有限,因此研究噬菌体宿主特异性对于噬菌体治疗应用具有重要意义。本研究通过筛选大肠埃希菌宿主菌BL21噬菌体IME253的耐受菌,结合对敏感菌和耐受菌的高通量测序,分析基因组差异,预测噬菌体耐受相关基因,发现耐受与外膜受体蛋白FepA有关。然后利用向导CRISPR/Cas9切开敏感菌fepA基因,同时利用Red同源重组系统无痕敲除fepA基因,证明fepA基因敲除可以导致细菌BL21对噬菌体IME253耐受。本实验利用比较基因组学分析平台,建立了一种宿主耐受噬菌体的分析方法,并且利用CRIPSR无痕敲除技术来验证耐受相关基因,为噬菌体治疗提供理论基础。
- 邢少贞赵飞扬孙强米志强安小平童贻刚赵宝华
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- 一种特异定量检测葡萄球菌的方法
- 本发明公开了一种特异定量检测葡萄球菌的方法。本发明公开的一种重组溶葡球菌酶,为如下1)或2)所示:1)SEQ?ID?No.2中自N端起第13位至第258位氨基酸所示的蛋白;2)将1)的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的...
- 童贻刚李玉元米志强安小平
- 文献传递
- shRNA随机文库结合TK自杀基因筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子
- 2012年
- 构建shRNA随机文库与HIV-1 LTR启动胸苷激酶基因(TK基因)稳定表达的稳定细胞系HEK293/TK,将两者结合起来,筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子。方法:通过化学合成含有19个随机脱氧核苷酸的发夹结构,将其退火补平后与合成的接头Linker连接进行PCR反应,将PCR产物酶切后置于慢病毒载体pLenti-U6启动子下游由此构建shRNA随机文库;利用重叠PCR将HIV-1 LTR片段和TK基因连接起来,连接产物经酶切后与pcDNA3.1载体连接;将连接正确的质粒转染HEK293细胞同时用G418加压筛选获得稳定细胞系HEK293/TK;将所获得的文库质粒包装成慢病毒后侵染所构建的HEK293/TK细胞系,通过加入药物GCV进行加压筛选获得存活细胞。结果:成功筛选到加药后存活下来的细胞,抽提细胞基因组,采用巢式PCR扩增目的干扰序列并用Western blot对干扰序列进行验证,鉴定获得一个克隆所表达的shRNA能对TK基因的表达起到抑制作用,通过测序分析获得其干扰序列,该序列很有可能针对HIV-1 LTR某宿主相关因子。结论:成功构建了一种筛选HIV-1 LTR相关宿主因子的方法,筛选所得序列可以定位到具体相关宿主因子,为靶向筛选抗HIV-1药物提供了重要手段。
- 李建彬米志强安小平谭莉陈斌王晓娜范华昊张文慧张博方祥童贻刚
- 关键词:慢病毒载体
- 人免疫缺陷病毒假病毒药物筛选模型的构建及其应用被引量:1
- 2012年
- 目的:构建人免疫缺陷病毒(HIV)假病毒模型,用多种HIV逆转录酶和蛋白酶抑制剂作用于该模型,以检测其是否能有效用于HIV抑制药物的筛选。方法:通过载体改造获得最终慢病毒载体puc18-NL4-3-LUC-stop,其中含有萤光素酶基因,将该载体与包膜质粒VSV-G共转染293FT细胞,包装产生HIV假病毒,在假病毒包装和病毒感染293FT细胞的过程中加入蛋白酶和逆转录酶抑制剂,通过检测感染细胞中萤光素酶的表达来检测该模型的有效性,并利用此模型检测药物的抗病毒效果。结果:将HIV逆转录酶和蛋白酶抑制剂作用于该假病毒模型时发现萤光素酶的表达得到很大程度的抑制。结论:建立了HIV假病毒药物筛选模型,该模型以萤光素酶基因作为报告基因,快速灵敏,在抗HIV药物筛选中有一定的应用价值。
- 李建彬陈斌米志强安小平李存刘大斌王晓娜范华昊方祥童贻刚
- 关键词:人免疫缺陷病毒慢病毒载体假病毒药物筛选
- 一种基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型
- 目的:构建基于荧光素酶的单次感染HIV药物筛选细胞模型用于抗HIV药物筛选。
方法:构建含荧光素酶报告基因luc的假型慢病毒质粒,将VSV—G外膜糖蛋白的表达质粒,HIV-1 Rev蛋白表达质粒,HIV Gag...
- 张昕张宝中安小平刘大斌王盛李敬云周育森童贻刚
- 关键词:荧光素酶基因HIV感染药物筛选细胞模型
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