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吴华伟
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- 所属机构:中国兽医药品监察所
- 所在地区:北京市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家科技基础性工作专项
相关作者
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- 从云南某牛场疑似BVDV感染的病料通过接种MDBK细胞分离到1株BVDV,为了解分离毒株的特性,进行了病原学和分子生物学研究。该分离毒株连传15代均不产生CPE,为NCP型BVDV。通过电镜检测可观察到直径为40~60 nm病毒粒子。该分离病毒能被牛病毒性腹泻标准阳性血清中和,且能被BVDV IFA荧光抗体识别;采用BVDV 5'-UTR基因特异性引物,经RTPCR可扩增出288 bp特异性片段。将该片段测序后与Gen Bank已发表的30株BVDV 5'-UTR序列进行同源性比较,同源性为68.7%~89.2%。与我国分离的BJ1202株(登陆号:KF925514.1)和Y2株(登陆号:KY964311.1)同源关系最近,均为89.2%。与2014年以来我国分离的BVDV毒株亲缘关系在88%左右。5'-UTR遗传进化分析证实该分离毒株为BVDV-1型。动物回归试验显示,该分离毒株可引起出现体温升高、腹泻、粘膜病等典型的BVD/MD症状。结果表明,分离的毒株为BVDV,命名为BVDV/W株。
- 范娟吴华伟郎洪武郝雪斌陈晓春刘国英高金源赵丽霞邓永范秀丽
- 喷雾-复凝聚法制备小反刍兽疫缓释微囊疫苗的研究
- 2010年
- 建立了喷雾-复凝聚法制备灭活PPR微囊疫苗的工艺方法,并对制备的疫苗进行了主要性能指标测定和动物试验。结果显示:三批微囊形态均呈不规则长囊状,平均包埋率为42%,包埋前后灭活PPRV抗原活性得到较好保持。制备的灭活PPR微囊疫苗在免疫绵羊后1个月,中和抗体滴度均能达到1∶20以上,均高于小反刍兽疫弱毒疫苗1∶10的质量标准,最高可达到1∶160;且中和抗体滴度至少能持续7个月,呈现出良好的缓释效果,是一种具有广阔应用前景的新型疫苗。
- 吴华伟支海兵王彬
- 关键词：小反刍兽疫微囊疫苗
- 副流感病毒5型荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2021年
- 为建立检测副流感病毒5型(PIV5)的荧光定量RT-PCR方法,针对PIV5 L基因设计筛选出一对特异性引物和探针,对退火温度、引物浓度、探针浓度进行了优化,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果显示:最适退火温度为54.7℃,最适引物浓度为0.5μmol/L,最适探针浓度为0.1μmol/L。检测灵敏度为10 copies、0.8 TCID50,特异性结果显示与BPIV3等22种常见病毒及原辅材料均无交叉,重复性试验显示不同模板浓度重复检测变异系数均小于1.5%,重复性良好。
- 吴华伟秦义娴陈晓春高金源邓永刘丹苏佳薛青红陈延飞
- 关键词：荧光定量RT-PCR
- 一株牛副流感病毒3型NP蛋白杂交瘤细胞株及单抗和在检测抗原中的应用
- 本发明提供了一株牛副流感病毒3型NP蛋白杂交瘤细胞株及单抗和在检测抗原中的应用，属于免疫检测技术领域。本发明提供了一株牛副流感病毒3型NP蛋白杂交瘤细胞BPIV3Mab‑NP‑11株，已完成生物保藏，保藏编号为CGMCC...
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- 以灭活的浓缩小反刍兽疫病毒(PPRV)为抗原,利用天然生物可降解型材料——海藻酸钠和壳聚糖,探索了采用内源乳化法制备兽用缓释微囊灭活疫苗的可行性。通过正交试验,确定了内源乳化法制备PPR缓释微囊灭活疫苗的较佳工艺,在此工艺条件下制备了3批PPR缓释微囊灭活疫苗,并进行了主要性能指标的测定和动物试验。结果显示,较佳工艺条件为:海藻酸钠浓度为20 g/L,司盘-85浓度为20 mL/L,搅拌速度为400 r/min,水油相比例为1∶5;制备的3批微囊疫苗形态和均匀度良好,平均包埋率为75.1%,在体外生理盐水中可持续释放18 d,且灭活PPRV在包埋后仍保持良好的免疫原性;免疫绵羊后第15天,中和抗体效价均能达到1∶10以上,最高可达到1∶90,高于农业部颁布的小反刍兽疫弱毒疫苗效力检验的质量标准(1∶10),且中和抗体效价能持续6个月。结果表明,采用内源乳化法制备的兽用PPR缓释微囊灭活疫苗的免疫原性和缓释效果良好,具有广阔的应用前景。
- 吴华伟支海兵
- 关键词：小反刍兽疫微囊疫苗免疫效果
- 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒NASBA-ELISA检测方法的建立被引量：11
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- 针对猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF1中编码Nsp2的基因序列设计引物,建立了核酸序列依赖性扩增(NASBA)方法,并结合微孔板中液相杂交和酶标显色反应检测NASBA扩增产物,建立了检测高致病性PRRSV的NASBA-ELISA。琼脂糖凝胶电泳显示,NASBA方法扩增出了特异性的目的条带。将NASBA产物RNA系列稀释后同时进行了ELISA和Northern杂交。结果显示,ELISA和Nor-thern杂交最高可分别检测到1∶50和1∶30稀释的产物RNA。采用建立的NASBA-ELISA可检测到101.83TCID50/mL的HuN4株PRRSV。该方法只对3株高致病性PRRSV的检测结果为阳性,对经典株PRRSV和其他猪源病毒的检测结果均为阴性。结果表明,NASBA-ELISA能够敏感并特异地检测高致病性PRRSV。
- 梁海霞薛青红高金源邓永陈晓春吴华伟郎洪武
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- 鸡传染性法氏囊病病毒BC6/85株VP2基因的原核表达、纯化及鉴定被引量：6
- 2015年
- 为获得可用于鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体检测的重组抗原VP2蛋白,根据GenBank中发表的IBDV VP2序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV经典标准攻毒株(BC6/85株)的VP2基因,插入质粒pET-32a中构建重组表达质粒pET-32a-VP2,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。重组蛋白纯化后,Western-blot检测表明具有良好的反应原性。本研究为下步建立IBDV抗体的间接ELISA方法及新型疫苗的研制奠定了基础。
- 刘丹杨承槐吴华伟李启红高金源陈建郎洪武
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因克隆原核表达
- 猪圆环病毒病及其生物制品学的研究进展
- 结合国内外对猪圆环病毒病的研究结果，概述了猪圆环病毒病的主要临床类型及其流行病学特点，并对其病原学、免疫学及生物制品学方面的研究进展进行了综合论述，为认识该病并有效防控该病提供参考。笔者认为，猪圆环病毒2型的危害主要体现...
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- 关键词：猪圆环病毒病病原学免疫学生物制品学
- 猪传染性胃肠炎病毒的分离与鉴定被引量：9
- 2018年
- 将经胶体金试纸条和RT-PCR鉴定为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性的内蒙古某猪场的粪便样品,经ST细胞分离培养后,得到一株能产生明显细胞病变的毒株。纯净性检测结果显示,该毒株无细菌生长,无支原体及无外源病毒污染。特异性检测结果表明:该分离株能被TGEV特异性阳性血清中和,且能被TGEV FA荧光抗体识别。采用TGEV N基因特异性引物,经RT-PCR可扩增出1215 bp特异性片段,将该片段测序后与GenBank中已发表的13株TGEV N基因的序列进行同源性比较,同源性为98.1%~100%,其中与我国分离的H16、JS2012以及Miller M6毒株同源性关系最近,均为100%。结果表明,分离到的毒株为TGEV,命名为TGEV NMG株。
- 李嘉琛吴华伟陈晓春邓永曹明慧韩爽夏业才
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒特异性
- 小反刍兽疫缓释微囊疫苗制备技术研究
- 小反刍兽疫/(PPR/)是由小反刍兽疫病毒/(PPRV/)引起的一种重大烈性传染病。2007年首次传入我国西藏地区,对我国畜牧养殖业构成严重威胁。国际上防控小反刍兽疫采取的接种弱毒疫苗措施,存在毒力返强的风险。灭活疫苗虽...
- 吴华伟
- 关键词：小反刍兽疫微囊疫苗
- 文献传递
