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沈大棱
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- 所属机构:复旦大学生命科学学院
- 所在地区:上海市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:美国McKnight基金
相关作者
- 叶鸣明
- 作品数：36被引量：264H指数：8
- 供职机构：复旦大学
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- 明凤
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- 供职机构：复旦大学
- 研究主题：水稻 基因工程技术 重组表达载体 月季 基因
- 曲志才
- 作品数：56被引量：351H指数：12
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- 梁斌
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- 王敬文
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- 供职机构：复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系
- 研究主题：水稻 重组表达载体 RAPD分析 RAPD 亲缘关系
- 植物转基因方法概述被引量：77
- 1999年
- 综述了植物基因转化的不同方法。植物基因转化方法主要包括直接基因转移和农杆菌介导的转化，直接基因转移又包括PEG介导、电激介导和基因枪方法。相比之下，农杆菌转化方法具有明显的优势；本文对其方法和机制作了较为全面的介绍。
- 叶健明唐克轩沈大棱
- 关键词：农杆菌转化
- 应用共生微生物遗传防治水稻虫媒疾病的研究进展
- 昆虫共生/寄生微生物Wolbachia广泛存在于自然界中,对昆虫宿主的生物学特性,特别是繁殖特性产生重要影响,包括引起孤雌生殖、杀雄、性别转换和胞质不相容性等。携带Wol-bachia的昆虫具有繁殖上的优势,可以在野生种...
- 钟江沈大棱李昌本O’Neils SHull R
- 关键词：共生微生物WOLBACHIA害虫防治
- 文献传递
- 水稻黑条矮缩病毒基因组组分10编码的外壳蛋白基因的克隆及表达被引量：4
- 2002年
- 从我国山东发病的玉米材料中提取水稻黑条矮缩病毒 ,抽提病毒RNA ,经RT PCR ,克隆了编码外层外壳蛋白的基因组组分 10 (S10 )的cDNA ,并进行了序列测定 .与已报道的日本株和湖北等地的S10进行了序列同源性比较 .结果表明 ,与日本株的同源性为 92 % ,与湖北等地的同源性在 97%～ 98%之间 .将该序列构建到pGEX 3X表达载体中 ,经IPTG诱导 ,表达了分子质量约为 76ku的GST融合蛋白 .经亲和层析纯化和Western印迹分析 ,证实了该基因以可溶性的GST融合蛋白形式在原核中表达 .
- 白逢伟曲志才曹清玉许嘉叶鸣明沈大棱
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白基因克隆S10
- 麦氏基金资助粮食作物合作研究项目
- 1997年
- 粮食问题是发展中国家头号的经济和社会问题。据联合国统计,到本世纪末,发展中国家至少有8亿人在饥饿线上挣扎和处于营养不良状态,而到2030年,世界人口将增加到87亿,粮食生产需翻倍才能维持人们的基本需求,粮食问题不仅仅是人口增长单个因素,耕地减少、水源枯竭、水土流失、病虫害、储备困难以及不合理的价格等也都影响到粮食问题。
- 沈大棱
- 关键词：粮食作物
- 转基因培育抗除草剂水稻被引量：26
- 2000年
- 以ｐＡＨＣ２０（含Ｂａｒ基因）和ｐＷＲＧ１５１５（含ＧＵＳ基因和潮霉素抗性基因）以及含Ｂａｒ基因和雪莲凝集素（ＧＮＡ）基因的ｐＣＡＭＢＩＡ３３００ ＲＧ为供体ＤＮＡ，选用水稻品系８７２０３、上农香糯及鄂宜１０５的成熟胚诱导出的愈伤组织及微不定芽为受体材料，分别采用基因枪和根癌农杆菌（ＬＢＡ４４０４，含ｐＡＭ４０４）导入法进行基因转化；经抗性筛选、ＧＵＳ检测和ＰＣＲ分析。结果表明，外源基因已通过基因枪法导入水稻鄂宜１０５，并获得再生植株；
- 吴爱忠唐克轩潘俊松蔡润沈大棱潘重光
- 关键词：水稻抗除草剂BAR基因
- 盐藻启动子活性片段的克隆及序列分析被引量：14
- 2002年
- 报道了以启动子探测质粒 pECE7为载体克隆盐藻 (Dunaliellasalina)中具有启动子活性DNA片段的研究 .经限制性内切酶EcoRⅠ分别消化盐藻基因组DNA和质粒pECE7,并进行体外重组及转化筛选 ,得到一具有启动子活性的DNA片段Ped .经进一步氯霉素抗性筛选 ,证明此启动子具有较高的活性 .测序结果显示Ped长 2 4 3bp .对其序列分析表明它具有启动子初级结构的基本特征 .Southern杂交显示此启动子片段确实来自于盐藻基因组 ,且其广泛存在于整个基因组中启动盐藻基因的表达 .经推测 ,Ped中含有多种转录因子结合位点的同源序列 。
- 张晓宁王昊陈火英沈大棱
- 关键词：克隆盐藻启动子
- 稻胚凝集素基因的克隆、序列分析及表达被引量：3
- 1999年
- 以水稻基因组ＤＮＡ为模板，以特异引物经聚合酶链式反应方法扩增出稻胚凝集素基因并克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＳｍａⅠ位点。序列分析表明，克隆到的基因片段大小为７８１ｂｐ，没有内含子，编码１条长２２７个氨基酸、分子量约２３ｋＤ的肽链，其中Ｎ－端２８个氨基酸是信号肽。与报道的稻胚凝集素ｃＤＮＡ序列进行顺序同源性比较，发现它们之间有很高的同源性（９９．７４％），其编码区第１６７和５６３位各有１个碱基突变，但两者均为同义突变，并未造成氨基酸序列的变化。回收插入片段克隆到表达载体ｐＲＳＥＴ－Ｃ中，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中得到表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱扫描结果表明，融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的５％。鉴于凝集素可能具有抗病虫害的能力，稻胚凝集素基因的克隆及其在原核系统中的成功表达有助于我们进一步揭示稻胚凝集素在植物防御以及其他生理活动中的功能。
- 郝峥嵘刘庆法季昀叶鸣明陈永青沈大棱
- 关键词：基因表达水稻
- 将GNA基因导入莴苣(L.sativa)及其表达的研究被引量：11
- 1998年
- 将含CaMV35S启动子的雪花莲凝集素基因置换Ti质粒载体pBI121中的GUS基因得到了pBIGNA质粒，将其导入农杆菌LBA4404，得到LBA4404（pBIGNA）菌株．通过该农杆菌介导转化莴苣子叶，筛选得到了17个具有卡那霉素抗性的转化子，其中3个转化子PCR鉴定的结果为阳性，用Western杂交检测了这3个转化子中的GNA含量，结果表明第2号转化子中的GNA表达量为可溶性蛋白总量的0．4％．由于GNA在0．1％浓度时就对包括蚜虫在内的刺吸式昆虫具有显著的毒杀作用，因此推测此转基因莴苣可能具有抗蚜虫能力．另用DotWestern杂交检测LBA4404（pBIGNA）中GNA的表达量，排除了农杆菌污染的可能．
- 郭文俊李瑶唐克轩董铮叶明鸣沈大棱
- 关键词：莴苣GNA基因基因表达
- 农杆菌介导的小麦遗传转化条件的研究被引量：44
- 1998年
- 利用来自小麦花药、幼胚愈伤组织和带有GUS基因的Ti质粒，对农杆菌转化小麦的条件进行了初步研究，证实适当浓度的乙酰丁香酮是诱发T－DNA转移的必需条件，其最低有效浓度为50μmol／L．在20～35℃，pH5．2～6．8条件下，均可有效诱导T－DNA的转移．农杆菌菌液密度以108ml－1细胞为宜，添加适当的表面活性剂有促进T－DNA转化的作用．对4种小麦材料的研究证明，T－DNA的转移效率常因受体材料基因型的不同而有很大差异；愈伤组织的活力与T－DNA转移的效率有密切关系．显微观察发现，胚状体细胞比非胚状体细胞群更容易发生转化．
- 刘庆法唐克轩叶建明郝峥嵘何艺园沈大棱
- 关键词：小麦农杆菌介导基因转化遗传转化条件
- 激素对小麦和小黑麦杂交后代花药培养和染色体加倍的影响被引量：15
- 1998年
- 用不同培养基对小麦和小黑麦杂交后代进行花药培养，发现含2．4－D和6BA（V（2．4－D）：V（68A）＝2：1）的培养基上形成的愈伤组织，其再分化苗的绿苗率和染色体加倍年远高于其他培养基．说明杂交后代对不同的细胞分裂素的敏感度是不同的，而6BA作为一种细胞分裂素，其作用也不仅仅是有助于愈伤组织的再分化．这对花药培养进一步的理论研究会有所帮助．
- 李文卓郝峥嵘崔建平沈大棱吴根法陶建秋
- 关键词：小麦小黑麦花药培养染色体加倍激素杂交
