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于萍
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- 所属机构:首都医科大学中医药学院
- 所在地区:北京市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
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- 目的研究淫羊藿、女贞子配伍对自噬激活剂雷帕霉素(rapamycin,RAP)诱导的气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)自噬、凋亡及增殖活性的调节作用。方法培养大鼠原代ASMCs,随机分为正常组、RAP组、淫羊藿组、女贞子组、配伍组。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清;除正常组外,其余各组同时加入RAP诱导的ASMCs,48h后进行检测。电镜观察细胞超微结构;MTT法检测细胞活力;免疫细胞化学法检测增殖蛋白ki-67蛋白表达,评价细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡活性;Western blot法和细胞免疫荧光法检测LC3、Beclin-1、mTOR、p-mTOR、Bax、Bcl-2、caspase-3及p53蛋白表达。结果淫羊藿、女贞子配伍能显著抑制RAP诱导的ASMCs自噬,下调LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(P<0.05)及Beclin-1蛋白表达(P<0.01);改善RAP诱导的细胞活力、增殖活性降低(P<0.01);抑制凋亡水平升高(P<0.01),且优于淫羊藿、女贞子单用组(P<0.05或P<0.01)。此外,配伍组能上调caspase-3蛋白表达(P<0.05),下调p53蛋白表达(P<0.01);但对mTOR及p-mTOR、Bax及Bcl-2蛋白表达无显著影响。结论淫羊藿、女贞子配伍能抑制RAP诱导的ASMCs的过度自噬/凋亡水平,恢复ASMCs的细胞活力及增殖活性,避免ASMCs过度损伤。
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- 王晶董一鑫贺丽莹苏比努尔·亚森孙逸轩于萍邹海艳
- 关键词：竹节参皂苷类大孔树脂中药工艺改进
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- 目的研究淫羊藿女贞子合用糖皮质激素对自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)抑制气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)自噬的影响。方法培养大鼠原代ASMCs,随机分为5组,即正常组(正常大鼠血清)、3-MA组(正常大鼠血清+3-MA)、激素组(正常大鼠血清+3-MA+地塞米松)、中药组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清)、合用组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清+地塞米松)。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清;除正常组外,其余各组同时加入3-MA刺激ASMCs,48h后进行检测。电镜观察细胞超微结构;MTT法检测细胞活力:免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达;Annexin V-FITC/PI法检测凋亡活性;Western Blot或免疫荧光法检测LC3、Bax、Bcl-2、P53、Caspase-3、Beclin-1、mTOR、p-mTO R蛋白表达。结果与3-MA组比较,各给药组可不同程度地增加3-MA抑制的自噬活性,上调LC3 II/I比值、Beclin-1表达,下调mTOR及p-mTOR表达下调;继续下调ASMCs细胞活力并上调凋亡活性,其中激素单用或与中药合用可显著下调Ki-67蛋白表达而抑制细胞增殖,各给药组Bax、Caspase-3、P53表达显著上调;此外,与激素组相比,合用组Beclin-1、mTOR、Bax、Bcl-2、Bax/Bcl-2、Caspase-3、P53均有统计学差异。结论激素、中药或二者合用均可重新激活3-MA引发的自噬阻断,进一步抑制ASMCs增殖、诱导细胞凋亡,且合用后在一定程度上发挥协同增效作用。
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