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PCV-2PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法的建立与应用
2024年
为了建立一种快速鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪圆环病毒4型(PCV-4)的方法,试验设计合成PCV-2PCV-3、PCV-4特异性鉴别检测引物,经一步法三重RT-PCR反应条件的优化,建立了PCV-2PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法。该方法对PCV-2PCV-3、PCV-4、PCV-2/PCV-3/PCV-4可分别扩增出216、415、678 bp、216 bp/415 bp/678 bp的特异性条带,检测PRV、PPV、PRRSV、CSFV、PEDV、TGEV均为阴性,对PCV-2PCV-3、PCV-4的最低检测量分别为1.0×102、1.0×10^(3)、1.0×10^(3)拷贝/μL,与PCV-2PCV-3、PCV-4单项PCR方法的符合率均为100%,应用该方法检测85份临床病料样品,PCV-2PCV-3、PCV-4阳性感染率分别为21.17%、14.12%、4.71%。说明建立的PCV-2PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性,为PCV-2PCV-3、PCV-4的临床鉴别诊断提供一种简便、快速的分子生物学检测技术。
王勤欧云文汪洋潘琴刘俐君何博
关键词:PCV-2三重PCR
cGAS蛋白促进PCV-2茎环结构诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应研究
2024年
为了探索猪圆环病毒2型(PCV-2)DNA茎环结构是否可以激活环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cGAS),以及是否诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应,试验将含有PCV-2茎环结构的单链DNA(SL-DNA)转染至PK15细胞中,通过Western-blot检测cGAS蛋白是否在PK15细胞中表达;将SL-DNA转染至过表达及敲除cGAS蛋白的PK15细胞中,通过实时荧光定量PCR检测细胞中cGAS、干扰素刺激基因(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素-β(IFN-β)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的表达水平。结果表明:SL-DNA转染后,PK15细胞中cGAS蛋白表达量上升;过表达cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著升高(P<0.01);敲除cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著降低(P<0.01)。说明cGAS蛋白可以识别PCV-2的茎环结构,并且促进其诱导的cGAS-STING信号通路天然免疫反应。
苏冰邓治邦
关键词:茎环结构天然免疫反应
引起典型PDNS的PCV-2病原分子特征分析
2024年
为了了解引起贵州省贵定县某猪场育肥猪群出现的典型猪皮炎肾病综合征(PDNS)的PCV-2的分子特征,试验首先对采自该猪场患病猪血清进行PCR扩增和克隆测序,然后采用多种分子生物学软件及网站对PCV-2的基因型、基因结构、推导蛋白等进行研究。结果表明:PCR扩增得到大小为1767 bp的条带,与GenBank中CZ246毒株序列(登录号为MZ995482)的相似性最高,将获得的毒株命名为PCV-2 GZGD2022PCV-2 GZGD2022株为PCV-2d基因型,与PCV-2d参考株NLControl4(登录号为AY484410)相比,含10个开放阅读框(ORF),缺失ORF8,其ORF5终止密码子提前,大小仅为21 bp。该毒株在基因组第1042位有1个碱基T的缺失,但导致Cap蛋白C末端延伸的是脯氨酸(P)而非赖氨酸(K)。与疫苗株(LG株、DBN-SX07-2株、ZJ株、SH株)相比,在Cap蛋白的抗原表位区有7个特异性突变点(F53I、R59K、A68N、T134N、A190T、A68N、T134N)。上述疫苗株之间磷酸化位点的差异主要集中在Cap蛋白上,在88 aa处多了1个丝氨酸磷酸化位点,在47 aa、134 aa、149 aa处少了1个苏氨酸磷酸化位点,在55 aa和218 aa处少了1个酪氨酸磷酸化位点。Rep蛋白有3个N糖基化位点(23NPS25、256NQT258和286NAT288),Cap蛋白有1个N糖基化位点(143NYS145)。Rep、Cap蛋白为混合型蛋白。此外,Rep、Cap蛋白有一些特殊功能结构域,如前者的PH-LIKE、NACHT等结构域和后者的乙酰化修饰位点(1MTYPR6)与核定位信号(NLS)。说明引起贵州省贵定县某猪场猪群出现典型PDNS的致病株为PCV-2d基因型,该毒株缺失ORF8,编码蛋白的氨基酸、抗原表位和磷酸化位点的改变可能是导致其毒力较强、引起典型PDNS的原因。
边孟婷梁海英曾智勇汤德元王彬叶泥柳佳佳黄书潘向英田红利
关键词:猪皮炎肾病综合征分子特征CAP蛋白REP蛋白
无ASFV及PCV-2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用
本发明提供了一种无ASFV及PCV2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用,属于动物疫苗生产技术领域。该培养基包括:磷酸氢二钠10g/L,磷酸二氢钾3g/L,氯化钠5g/L,酵母粉15g/L,胨类混合物30g/L,纯化水...
陈辰王宇陈坤孙晋超宋秀梅李秀辉杨飞杨阳郇春燕刘超张桐
无ASFV及PCV-2的猪肺炎支原体培养基、其制备方法及应用
本发明公开了一种无ASFV及PCV2的猪肺炎支原体培养基、其制备方法及应用,属于动物疫苗生产技术领域。在该技术方案中,基础培养基主要成分有:多价浸粉、酵母浸出液、水解乳蛋白、10x Hank's液、L‑精氨酸、L‑赖氨...
郇春燕孙晋超刘超王宇宋秀梅杨飞杨阳李秀辉张桐陈坤陈辰
无ASFV及PCV-2的猪多杀性巴氏杆菌培养基、其制备方法及应用
本发明提供了一种无ASFV及PCV2的猪多杀性巴氏杆菌培养基、其制备方法及应用,属于动物疫苗生产技术领域。该培养基包括以下成分:植物蛋白胨20g/L、酵母浸出粉15g/L、水解乳蛋白5g/L、氯化钠2g/L、氯化钾0....
李秀辉宋秀梅张桐孙晋超王宇杨飞杨阳郇春燕刘超陈坤陈辰
无ASFV及PCV-2的猪多杀性巴氏杆菌培养基、其制备方法及应用
本发明提供了一种无ASFV及PCV2的猪多杀性巴氏杆菌培养基、其制备方法及应用,属于动物疫苗生产技术领域。该培养基包括以下成分:植物蛋白胨20g/L、酵母浸出粉15g/L、水解乳蛋白5g/L、氯化钠2g/L、氯化钾0....
李秀辉宋秀梅张桐孙晋超王宇杨飞杨阳郇春燕刘超陈坤陈辰
PCV-2PCV-3 Cap蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达和鉴定
2023年
为了实现猪圆环病毒2型(PCV-2)和3型(PCV-3)Cap蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,本试验利用刚性连接肽连接PCV-2PCV-3 Cap基因,构建杆状病毒转移载体pFastBac-PCV-2-3-Cap,双酶切验证正确后,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆粒。将重组杆粒转染SF9细胞(昆虫卵巢细胞),盲传3代,获得重组病毒。将重组病毒接种SF9细胞96 h后,通过细胞免疫荧光检测、Western blot和电镜观察对其进行验证,并利用噬斑法检测其效价。结果显示:成功构建重组质粒pFastBac-PCV-2-3-Cap,获得了重组杆粒rAcBacmid-PCV-2-3-Cap,并制备出重组杆状病毒rvAc-PCV-2-3-Cap。重组病毒感染SF9细胞后,目的蛋白成功表达,并可以形成病毒样颗粒,病毒效价为3.41×10^(6) PFU/mL。本试验成功在昆虫细胞-杆状病毒系统中共表达了PCV-2-3-Cap,为防治PCV-2PCV-3混合感染的二联疫苗研究提供了数据支持。
董宇璠金宏凯孙莉费东亮马跃宇马鸣潇李明
关键词:PCV-2杆状病毒
某猪场致生长育肥猪腹泻的猪圆环病毒2型(PCV-2)病原学检测与病理组织学观察
2023年
某猪场80日龄左右的生长育肥猪群出现顽固性腹泻,腹泻粪便的形状复杂,为了查明病原,该试验采集病猪病料,提取病毒DNA和RT-PCR检测,并进行病理变化分析和病理组织学观察。结果表明:实时荧光定量PCR检测显示猪圆环病毒2型(PCV-2)强阳性,剖检发现脾脏有轻微梗死、淋巴结萎缩,病理组织学观察发现回肠肠粘膜上皮细胞显著增生,由单层变为多层,淋巴结和脾脏的淋巴细胞数量显著减少。试验说明PCV2是引起该猪场育肥猪腹泻的主要病原。
张永康杨秀进
关键词:生长育肥猪腹泻PCV-2病原学检测病理组织学观察
母猪免疫PCV-2疫苗对仔猪感染PCV-3的影响被引量:1
2022年
为了解猪圆环病毒3型病毒(porcine circovirus 3 virus, PCV-3)ORF2基因的分子生物学信息,探寻防控PCV-3损害仔猪的可行方案。本研究通过对山西省某未免疫过PCV-2商品疫苗的规模化母猪场的妊娠母猪在产前45 d持续6批次免疫PCV-2疫苗,以所生仔猪生产成绩和PCV-3 ORF2基因阳性检出率为指标,评价母猪免疫PCV-2疫苗对仔猪PCV-3的感染和发病情况的缓解作用。临床数据显示母猪免疫PCV-2疫苗后生产的6批仔猪PCV-3 ORF2基因阳性率由45.0%逐渐降至20.0%,伤亡率由25.5%降至8.0%。试验结果显示,从死亡仔猪淋巴结分离出的6株PCV-3 ORF2基因序列同源性为98.4%~99.2%,均有17个磷酸化位点,预测Cap蛋白氨基酸N端不存在典型的信号肽结构,说明该蛋白位于胞外区的可能性更大,且未预测到跨膜结构存在;PCV-3 ORF2PCV-2a同源性为32.5%~32.9%,与PCV-2b同源性为30.8%~31.7%,与PCV-2d同源性为32.6%~33.5%,与PCV-4同源性为33.9%~34.3%,说明同源性低,进化不同步。因此,推测母猪通过持续的免疫PCV-2疫苗可解除PCV-2感染造成的机体免疫抑制,增强自身健康情况,降低PCV-3传播给仔猪的风险,用于控制仔猪群PCV-3流行是可行的应急方式。
张黎郑龙龙吕晓玲白瑞霍乃蕊郑明学
关键词:ORF2基因CAP蛋白

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许信刚
作品数:197被引量:663H指数:11
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李薇
作品数:13被引量:60H指数:5
供职机构:湖南农业大学
研究主题:亚群 PCV-2 感染性克隆 体内外 PCR
姜焱
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供职机构:南京农业大学
研究主题:伪狂犬病病毒 特异性 试剂盒 GE基因 PCR检测方法
张常印
作品数:111被引量:321H指数:10
供职机构:江苏出入境检验检疫局
研究主题:特异性 空肠弯曲菌 猪链球菌2型 试剂盒 牛传染性鼻气管炎病毒
谭诗文
作品数:60被引量:144H指数:7
供职机构:贵州省畜牧兽医研究所
研究主题:阴性对照 阳性对照 血清学调查 诊断试剂盒 诊治