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搜索到110篇“ HELA细胞系“的相关文章

利用CRISPR/Cas9技术构建ACBD3基因敲除Hela细胞系: 2024年; 利用CRISPR/Cas9技术敲除Hela细胞的乙酰辅酶A结合结构域3(ACBD3),构建ACBD3基因敲除的Hela细胞系,便于后续研究ACBD3对肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)生长发育的影响及相关信号通路。根据CRISPR/Cas9设计原则,设计向导RNA(sgRNA),将sgRNA与Cas9蛋白即RNP复合物通过电转染至Hela细胞,挑取单克隆细胞进行培养鉴定,利用Western blot和免疫荧光法检测ACBD3蛋白表达情况。测序显示成功构建敲除细胞株,Western blot和免疫荧光结果显示ACBD3蛋白不表达。利用CRISPR/Cas9技术成功构建ACBD3基因敲除的Hela细胞系,为进一步研究该基因对Cpn生长发育的作用及相关信号通路奠定了基础。; 冯晓楠贾天军; 关键词：HELA细胞基因敲除肺炎衣原体

基于胞嘧啶碱基编辑器构建ESM1基因敲除Hela细胞系: 2024年; 目的:基于胞嘧啶碱基编辑器(CBE)提前引入终止密码子构建内皮细胞特异性分子1(ESM1)基因敲除Hela细胞系。方法:根据NCBI数据库ESM1序列信息(Gene ID:11082),利用在线软件Benchling在ESM1基因1号外显子上设计2个向导sgRNA,构建对应的pX330-ESM1-sgRNA表达载体。将BE4max、ACBE-ASR、pX330-ESM1-sgRNA 3个质粒共转染Hela细胞,用嘌呤霉素富集筛选CBE工作阳性细胞。PCR扩增含靶点的序列并进行Sanger测序,比较2个sgRNA的效率。通过有限稀释法筛选单克隆细胞,扩大培养后进行测序及Western Blot检测。结果:测序结果显示pX330-ESM1-sgRNA表达质粒构建成功,sgRNA2的编辑效率为66%,远高于sgRNA1的编辑效率;10组细胞单克隆中有6组细胞的靶点进行了双等位基因精确编辑,成功提前引入了终止密码子;Western Blot结果显示ESM1被成功提前终止翻译,达到基因敲除的目的。结论:基于胞嘧啶碱基编辑器提前引入终止密码子的策略成功构建了ESM1基因敲除Hela细胞系,为后续研究ESM1在宫颈癌中的作用机制提供了实验材料,奠定了基础。; 汪悦郭颖庞娅璇崔堉熙麻丽霞; 关键词：基因敲除

MAVS^(-/-) HeLa细胞系构建及其在干扰素信号通路中应用: 2024年; [目的]通过CRISPR/Cas9技术构建线粒体抗病毒信号(mitochondrial antiviral signaling, MAVS)基因敲除的HeLa细胞系,并对细胞系的生长特性、及其对干扰素信号通路的影响进行初步鉴定。[方法]针对MAVS外显子设计构建靶向MAVS基因的guide RNA,并克隆至LentiCRISPR v2载体后包装成慢病毒,感染HeLa细胞后经嘌呤霉素筛选获得MAVS基因敲除的HeLa细胞,Western Blotting验证敲除效果,MTT法检测细胞生长活力,应用聚肌胞苷酸(Poly(I:C))刺激并检测细胞内干扰素-β(IFN-β)mRNA水平的变化。[结果]测序结果表明成功构建CRISPR-MAVS-gR质粒,包装成慢病毒并感染HeLa细胞,经筛选获得的细胞内MAVS mRNA及蛋白均不表达,生长速度及活性与野生型HeLa相同,Poly(I:C)刺激后,细胞内IFN-β变化不明显。[结论]通过CRISPR/Cas9技术获得MAVS基因敲除的MAVS^(-/-)HeLa细胞系,Poly(I:C)诱导剂不能在该细胞内激活干扰素信号通路,为后续研究MAVS相关的抗病毒天然免疫信号通路奠定了基础。; 姬红姬红那睿思董云霞程德春; 关键词：HELA 嘌呤霉素聚肌胞苷酸

PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响: 2024年; 目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证PPP2R1A参与调控的肿瘤转移相关基因和选择性剪接基因(ASGs)。结果与对照组比较,过表达PPP2R1A可显著抑制Hela细胞的增殖。PPP2R1A调控细胞黏附、病毒应答、细胞生长调节等数百个基因的表达水平,同时还调节参与细胞周期、连接黏附、子宫内膜癌和RNA转运基因的AS。结论PPP2R1A可能通过AS调控潜在转录来调控肿瘤的进展。; 曹博威张文斌; 关键词：HELA细胞系癌症选择性剪接细胞增殖

微小染色体维持蛋白2基因诱导性敲除宫颈癌HeLa细胞系的建立及对DNA复制的影响: 2024年; 目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)和敲除2组(KO2)。通过Western blot、EdU掺入实验、实时定量PCR、免疫荧光、CCK-8等实验,分析MCM2敲除对DNA复制和羟基脲诱导复制压力的影响。结果经过诱导后CRISPR/Cas9系统有效地敲除MCM2基因,并影响MCM2-7复合物的稳定。与对照细胞相比,MCM2敲除细胞DNA复制能力显著下降,同时Cyclin A1、Cyclin E1和CDK4的mRNA表达水平降低。在DNA复制压力下,MCM2敲除降低了细胞的存活能力、DNA损伤修复能力,并增加基因组的不稳定性。结论MCM2基因敲除降低正常条件下HeLa细胞的DNA复制能力,并降低复制压力后细胞的存活能力。本研究成功地构建了诱导性MCM2基因敲除HeLa细胞系,为进一步研究MCM2基因在宫颈癌中的作用及其生物学功能奠定了基础。; 李萍汤拓郑皑雪张鲁平王涛洪鲜邓志会; 关键词：宫颈癌 HELA细胞 DNA复制

miR-99a通过下调RRM2抑制人子宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和侵袭: 2022年; 目的探讨miR-99a与核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)的靶向关系,并分析二者对人子宫颈癌(CC)HeLa细胞系增殖、侵袭及迁移的影响。方法将HeLa细胞,分为对照组(control)、阴性对照组(inhibitor-NC)、抑制miR-99a表达组(miR-99a-inhibitor)、共转染组(RRM2-siRNA+miR-99a-inhibitor)。MTT法、平板集落实验检测细胞增殖;划痕实验、Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭;Western blot检测RRM2、细胞增殖核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin定位及表达;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a与RRM2靶向关系;RT-qPCR检测细胞中miR-99a、RRM2 mRNA水平。结果下调miR-99a表达,可增高HeLa细胞增殖率(100.00比128.86±4.25,P<0.05);上调集落形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数;增加RRM2、PCNA、N-cadherin与vimentin蛋白表达,降低E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。抑制RRM2表达能减轻下调miR-99a对HeLa细胞生物学行为的影响(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验及RT-qPCR证实miR-99a与RRM2存在靶向关系(P<0.05)。结论抑制miR-99a可能靶向上调RRM2表达并促进HeLa细胞增殖,有望成为CC新的潜在治疗靶点。; 贺春花刘冷张小柳; 关键词：宫颈癌细胞增殖

利用可诱导表达Cas9的HeLa细胞系进行顺铂耐药性基因筛选: 2021年; 目的:利用PiggyBac转座子系统,构建可诱导表达Cas9的稳定HeLa细胞系,并针对人核受体基因构建sg RNA文库,进行顺铂耐药性基因筛选。方法:构建PB-TRE-Cas9-NLS-IRES-hrGFP-Zeo载体,与PB-CAG-rtTA以及转座酶载体一同电转到HeLa细胞中,通过药筛和挑选单克隆得到稳定细胞系;构建核受体基因sgRNA病毒文库,并感染可诱导表达Cas9的HeLa细胞系,筛选对顺铂具有抵抗性的克隆,并进行目的基因的测序鉴定。结果:挑选出可诱导表达Cas9的8E单克隆细胞株,在5个基因位点上可以进行高效编辑;感染sgRNA文库之后,挑选顺铂耐药的克隆,并鉴定出大部分克隆含有VDR sg RNA,经测序发现这些克隆中的VDR基因发生突变。结论:利用PiggyBac转座子系统,构建了可诱导表达Cas9的稳定HeLa细胞系,利用这个细胞系可以在多位点进行高效基因编辑,并可用于高通量文库筛选顺铂耐药性基因。; 陈红全王建瑛; 关键词：PIGGYBAC转座子文库筛选

稳定敲降NF-YB基因HeLa细胞系的构建: 2020年; 目的:利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,构建稳定敲降NF-YB基因的HeLa细胞系。方法:设计shRNA-NF-YB引物,利用分子克隆技术构建H1/GFP-Puro-shRNA-NF-YB质粒,转染293T后收集病毒感染HeLa细胞;用嘌呤霉素筛选细胞得到稳定敲降细胞株;利用Western blot和实时荧光定量PCR对细胞系进行鉴定。结果:构建的质粒经测序后与设计的引物对比序列一致,Western blot和实时荧光定量PCR结果表明构建细胞的NF-YB蛋白和mRNA表达抑制效果明显。结论:本实验成功构建了NF-YB-shRNA-HeLa细胞系,获得了特异性NF-YB基因敲降的HeLa细胞。; 杜璐姜晓燕丁库克; 关键词：RNA干扰 HELA细胞慢病毒介导

稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系的建立被引量：5: 2020年; 为建立基于CRISPR-Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究利用慢病毒载体pMD2.G、pSPAX2(HIV-1的gag-pol表达质粒)和lentiCRISPR v2-Hyg包装慢病毒,感染HeLa细胞2 d后用400μg/mL潮霉素培养液筛选两周,获得稳定表达Cas9蛋白的多克隆细胞系。利用流式细胞分选系统分选及western blot鉴定获得9株HeLa-Cas9单克隆细胞系。为获得具有高效率敲除内源基因的HeLa细胞系,利用同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP sgRNA的慢病毒感染HeLa-Cas9单克隆细胞系,经1μg/mL嘌呤霉素培养液筛选一周,流式细胞术检测表达绿色荧光蛋白细胞的百分比,以计算HeLa细胞株的敲除效率,进而建立了一株稳定表达Cas9蛋白的具有高敲除效率的HeLa单克隆细胞系。该细胞的Cas9敲除效率为87%,CCK-8检测结果表明其具有很好的细胞活性。本研究获得的具有高敲除效率的稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系可以用于CRISPR敲除文库的转导,建立基因敲除细胞文库,为筛选参与特定功能的未知蛋白提供细胞平台。; 刘燕飞那雷王晓钧; 关键词：HELA细胞系

长链非编码RNA(AC073934.6)慢病毒质粒构建及其对HEY和HeLa细胞系SND1表达的影响: 2020年; 目的:构建长链非编码RNA AC073934.6(lncRNA-AC)的慢病毒质粒,在HEY和HeLa细胞中稳定表达,并观察其对邻近基因SND1表达的影响。方法:提取基因组DNA,扩增出lncRNA-AC外显子1(F1R1)和外显子2(F2R2),化学合成外显子3(F3R3)。利用重叠延伸PCR获得上述3个DNA片段的连接产物(F1R3);通过同源重组的方法将F1R3和慢病毒载体pLVXIRES-Puro连接起来,构建pLVX-lncRNA-AC重组质粒。用慢病毒包装的方法获得过表达lncRNA-AC的慢病毒,随后感染HEY和HeLa细胞系,PCR检测lncRNA-AC的转录,通过实时荧光定量PCR和Western印迹检测SND1表达。结果:通过菌液PCR和测序验证了重组质粒pLVX-lncRNA-AC构建成功;利用慢病毒感染细胞后,通过PCR检测过表达lncRNA-AC的稳定株构建成功;在稳定株中通过实时荧光定量PCR检测SND1的mRNA水平,在HEY细胞系中,WT和过表达lncRNA-AC后SND1的mRNA相对表达量分别为1.00±0.14和1.24±0.19,两者比较,差异无统计学意义(t=1.761,P=0.07);在HeLa细胞系中,两者的表达量分别为1.02±0.09和0.83±0.13,差异无统计学意义(t=2.081,P=0.14),同时Western印迹检测SND1的蛋白水平无明显差异。结论:在HEY和HeLa细胞系中过表达lncRNA-AC不影响SND1的表达。; 扈利红邱宝晨辛灵彪张纬; 关键词：质粒构建同源重组

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