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辣椒E2基因家族的鉴定及分析: 2024年; 【目的】泛素结合酶E2(UBC)作为泛素蛋白酶体途径中将泛素转移至靶蛋白的重要中转酶,与植物的生长发育和许多胁迫有关。从辣椒全基因组中鉴定E2基因家族成员,分析相关基因表达模式,为后续研究提供理论基础。【方法】基于辣椒全基因组信息,利用生物信息学方法对E2基因家族进行鉴定,系统分析该家族成员的基本理化性质、亚细胞定位、染色体定位、基因结构、系统进化关系、顺式作用元件、蛋白质互作网络、非生物胁迫响应与组织器官表达模式。【结果】辣椒E2家族有48个成员,在11条染色体上呈不均匀地分布,其编码蛋白主要定位于细胞外和细胞核中;通过对辣椒、番茄和拟南芥的比较进化分析将其分为GroupⅠ-GroupⅧ亚族,同一亚族具有相似的蛋白保守基序和基因结构;发现共有26个蛋白之间存在互作;顺式作用元件分析表明,CaUBC基因启动子区含有大量光响应、激素响应元件,上游2000 bp区域中存在多种与生长发育和抗逆性相关的顺式作用元件;CaUBC参与胁迫响应,在不同非生物胁迫和激素处理下,将其分为3类,其中高温环境下第3类基因为高表达;在组织器官中表现出不同的表达,其中CaUBC38在果实中的表达量变化较为明显,进行RT-qPCR分析发现,50 d相对表达量最高,10 d表达量最低。【结论】获得48个辣椒E2(CaUBC)基因,揭示了E2家族不同成员在辣椒生长发育和非生物胁迫过程中的表达特征。; 常雪瑞王田田王静; 关键词：辣椒泛素蛋白酶体系统非生物胁迫组织器官

2021年~2022年我国猪盖塔病毒流行情况调查及其E2基因序列遗传变异分析: 2024年; 为了解2021年~2022年我国猪盖塔病毒(GETV)的流行现状和遗传变异情况,本研究对我国16个省份采集2512份临床样品,采用荧光定量RT-PCR方法进行GETV的检测,按照省份和地区进行GETV流行病学调查分析;采用RT-PCR方法对部分GETV阳性样品经PCR扩增E2基因并连接至p MD18-T载体并测序,利用DNAStar软件分析E2基因及其编码氨基酸序列与GETV参考株相应序列的同源性及其氨基酸变异情况;利用MEGA6.0软件构建E2基因的进化树,分析GETV的基因型及遗传进化关系。结果显示,7个省份猪群样品中均检测出GETV阳性样品,阳性率为3.34%(84/2512)。其中,陕西省和黑龙江省为首次在猪中检测到GETV。不同生长阶段猪中,仔猪GETV的检出率最高,达9.52%。同源性分析显示,获得的32个猪源GETV E2基因序列之间的同源性为98.3%~100%,与马来西亚GETV MM2021株相应基因序列的同源性为94.4%~94.9%。氨基酸序列变异分析显示,与参考株相比,本研究测序的E2蛋白有9个氨基酸位点只出现于猪源GETV。遗传演化分析显示,32个GETV株均属于III亚群,与III亚群内早期中国M1株、韩国QIAG9301株、日本Kochi等病毒株相比,本研究鉴定的GETV形成了新的进化分支。本研究揭示了我国当前猪群中GETV的感染现状及流行株的遗传变异情况,为该病毒的分子生物学研究和相关疫病防控策略的制定提供基础数据和参考依据。; 吴语晗董雅琴崔进张慧顾丛丛刘爽房琳琳沙洲郑辉尼博魏荣段纲张锋; 关键词：盖塔病毒 E2基因流行病学调查遗传进化分析

水稻OsUGT706E2基因在调控水稻稻瘟病抗性中的应用: 本发明属于分子育种技术领域，具体涉及水稻OsUGT706E2基因在调控水稻稻瘟病抗性中的应用。为挖掘并克隆更多的稻瘟病数量抗性基因，本发明研究发现过表达OsUGT706E2能够显著降低转基因植株的稻瘟病叶瘟抗性，并且转基...; 刘清江立群李晨于航邢俊连陈平丽

种猪繁育与育肥场猪瘟E2基因工程疫苗免疫效果的调查与研究: 2024年; 为探究猪瘟E2基因工程亚单位疫苗相比于传统猪瘟C株弱毒疫苗(脾淋源)在免疫与生产上的优势,本文以汉中某一地方品种种猪场和代养场为调查对象,选择一批繁育母猪和育肥仔猪分别免疫猪瘟E2基因工程亚单位疫苗和猪瘟活苗,对比结果发现,母猪免疫猪瘟E2亚单位疫苗后哺乳仔猪断奶成活率平均提高了16.3%;且接种的两种猪瘟疫苗对育肥仔猪的免疫效果差异极显著(P<0.01),其中E2亚单位疫苗相比于猪瘟活疫苗能够明显提高育肥仔猪抗体阻断率和降低离散度,有助于育肥仔猪的健康生长,这为规模化猪场在选择猪瘟疫苗时提供重要参考依据。; 丁小成张宁兰天驰; 关键词：育肥仔猪免疫效果

猪瘟病毒E0+E2{2}的串联表达及多克隆抗体制备: 2023年; 串联表达猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)E0和E2蛋白,并制备多克隆抗体鉴定其免疫原性,为进一步研究亚单位疫苗和猪瘟ELISA抗体检测方法提供材料。应用PCR技术分别扩增CSFV E0和E2基因片段,运用重叠PCR将其串联扩增后克隆至pET-28a载体,构建重组表达质粒pET-28a-E0+E2。通过大肠杆菌表达系统表达重组蛋白E0+E2,切胶纯化后免疫昆明小鼠制备血清,通过间接ELISA方法测定抗体水平,间接免疫荧光(IFA)分析多克隆抗体的免疫原性和特异性。结果显示,37℃,1 mmol/L IPTG诱导条件下,E0+E2蛋白能够以包涵体形式表达,经纯化复性后免疫小鼠,制备的血清能与感染CSFV的细胞特异性反应。在大肠杆菌中高效表达了E0+E2蛋白,制备的多克隆抗体具有较高的特异性和反应性。; 向蕊朱利塞陶攀白挨泉王贵平贾爱卿; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白多克隆抗体

一例罕见G1P[8]-E2基因型轮状病毒重配株全基因序列分析: 2023年; 目的研究我国一例G1P[8]基因型A组轮状病毒(group A rotvirus,RVA)SC18511073的序列特征及进化规律,分析SC18511073与RotaTeq^(TM)和Rotarix^(TM)疫苗的抗原表位之间的差异。方法用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对SC18511073的11个节段进行RT-PCR扩增,利用在线RVA自动分型工具对其分型,采用DNAstar5.1和Mega11.0等软件对11个节段进行同源性及遗传进化分析。结果SC18511073全基因组基因型为G1P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E2-H1,NSP4为E2型。VP7和NSP3与同年份四川流行G1P[8]-E1型毒株同源性较高,系统进化树显示位于同一分支,其余9个基因节段均与我国流行的G9P[8]-E2型RVA高度同源,且归属于同一进化分支。SC18511073与RotaTeq^(TM)和Rotarix^(TM)在VP7的抗原表位中7-1a和7-2区域存在5个氨基酸差异;VP4蛋白裂解后的VP8^(*)抗原表位中8-1、8-3区域存在差异。结论我国2018年RVA毒株SC18511073为罕见的G1P[8]-E2型,推测是由G1P[8]-E1基因型与G9P[8]-E2基因型RVA毒株共感染过程中VP7和NSP3节段发生重配产生的新型毒株。SC18511073与RotaTeq^(TM)和Rotarix^(TM)在VP7和VP4上的抗原表位存在较多氨基酸位点差异。; 范佳欣王萌璇魏宇航彭蕊熊光萍唐晓苹李丹地; 关键词：A组轮状病毒基因型系统发育分析抗原表位

广西猪瘟病毒变异株分离鉴定及其E2基因遗传特性分析: 2023年; 【目的】明确猪瘟病毒(CSFV)广西分离株的分子流行病学特点和病原学特性,为科学使用CSF疫苗及有效防控广西CSFV流行提供参考依据。【方法】2019年12月—2020年10月,从广西南宁、隆安、柳州、百色及北海等地采集疑似CSFV感染的流产胎儿、死胎、木乃伊胎和弱仔猪的组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和淋巴结等)进行CSFV检测,通过PK-15细胞进行病毒分离,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定,克隆CSFV分离株E2基因,经DNASTAR进行核苷酸序列及推导氨基酸序列同源比对分析后以MEGA 6.0构建遗传进化树;同时以Shimen标准株为对照,检测感染PK-15细胞后分离株的生长曲线、病毒mRNA和E2蛋白水平。【结果】从104份疑似CSFV感染样品中分离出1株CSFV,命名为GXNN2019-13,接种至PK-15细胞后并未出现细胞病变。GXNN2019-13株与我国Shimen标准株(强毒)和HCLV株(弱毒)的E2基因核苷酸序列相似性较低,分别为84.6%和83.5%,而与日本CSF0745株及德国CSF0496和Alfort Tuebingen株的相似性分别为93.9%、92.2%和91.5%;GXNN2019-13株与Shimen和HCLV株的E2氨基酸序列相似性分别为89.3%和88.7%,与日本CSF0745株及德国CSF0496和Alfort Tuebingen株的相似性分别为95.5%、94.6%和93.8%;以HCLV株为参照进行多序列比对,发现GXNN2019-13株E2蛋白较Shimen标准株的变异程度更高。感染PK-15细胞后,GXNN2019-13株的病毒复制能力弱于Shimen标准株,生长曲线上各时间点的病毒效价及mRNA水平均低于Shimen标准株。【结论】从疑似CSFV感染病料分离获得的GXNN2019-13株属于2.3亚型中的独立小分支,与之前的广西分离株亲缘关系较远,可能是新的变异毒株,其复制能力弱于Shimen标准强毒株。; 高跃美梁晶晶王文锋唐紫燕陈俊蓉周桂全蓝常力刘芳罗廷荣李晓宁; 关键词：E2基因

马源人乳头瘤病毒23型E2基因的遗传变异分析: 2023年; 为调查马源人乳头瘤病毒(HPV)23型(HPV-23)在马群中的流行及遗传变异情况,本研究对413份马流产胎儿组织和20份马场工人鼻拭子样品经PCR检测,结果显示,在纯血马和伊犁马流产胎儿组织样品中均检出HPV-23,阳性率分别为4.3%(2/46)和9.3%(34/367),表明马流产胎儿携带HPV-23,该病毒可能导致马的流产;在马场工人鼻拭子样品中也检出HPV-23,阳性率为60%(12/20)。将其中12份检测为HPV-23阳性的样品进行E2基因的PCR扩增测序后,采用M{2}gAlign7.1.0软件分析本研究获得的HPV-23 E2基因与G{2}nBank中相关病毒参考株E2基因的同源性,并采用MEGA7.0.26软件构建人源与马源HPV-23 E2基因的进化树,分析其遗传进化特征。同源性分析结果显示,本研究测序的8株马源及4株人源HPV-23 E2基因与氨基酸序列的同源性均为100%,与国外2株人源HPV-23 E2基因序列的同源性为98.9%~99.2%,提示马源HPV-23可能来源于人。遗传进化分析显示,本研究鉴定的马源及人源HPV-23与国外人源HPV-23形成独立进化分支,且同处于β进化分支,与马乳头瘤病毒处于不同分支,进一步表明马源HPV-23可能来源于人。本研究首次在马流产胎儿组织中检测到HPV-23,提示该病毒可能导致马的流产,可能是人源HPV-23感染马,该结果为动物源HPV-23的流行病学研究提供了参考依据。; 田澍瑶谢金鑫贾陈阳罗生金沙娅·奴尔兰张磊杨恩慧帕丽旦·努尔兰况玲佟盼盼; 关键词：流产 E2基因进化树

细胞源猪瘟活疫苗E2基因遗传稳定性和免疫原性分析: 2023年; 测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与G{2}nBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通过生物信息学手段对预测的E2蛋白N-糖基化位点、E2蛋白磷酸化位点和理化特性以及模拟的蛋白空间结构进行了比较,并通过免疫攻毒试验对4个细胞源猪瘟疫苗(C株)的免疫效果进行了验证。结果表明,与猪瘟病毒C株原始种毒相比,尽管中国4个细胞源猪瘟活疫苗的E2基因核苷酸序列、推导的E2蛋白氨基酸序列或模拟的三维结构等发生个别核苷酸变异、个别氨基酸位点突变或缺失,但均不影响猪瘟C株的免疫原性,猪瘟疫苗C株仍然是防控猪瘟的最有效武器。; 吴华伟陈晓春黄小洁刘丹邓永秦义娴高金源薛青红孙淼陈建陈延飞; 关键词：猪瘟细胞源活疫苗 E2基因同源性免疫原性

无籽沙糖橘泛素结合酶E2基因CrUBC2的克隆及功能分析: 2023年; 泛素结合酶E2是底物泛素化的关键酶,通过泛素—蛋白酶体系统对雌蕊S-RNase进行泛素化和降解,在自交不亲和机制中发挥重要作用。以‘无籽沙糖橘’和‘沙糖橘’的花蕾为试材,以甜橙EST序列EY715921为依据克隆到965bp的cDNA全长序列,其编码152个氨基酸的UBC2蛋白,命名为CrUBC2。在‘无籽沙糖橘’和‘沙糖橘’的编码区发现1个C/T替换,并引起苏氨酸(Thr)变成异亮氨酸(Ile)。多序列比对表明‘沙糖橘’与其他8种植物UBC2仅有1个氨基酸差异,表现出进化中的高度保守性。qRT-PCR分析表明CrUBC2在花药中的表达量最高,异交授粉后的基因表达量是自交授粉的2.22倍~5.36倍,呈现明显的特异表达。体外花粉萌发试验表明,‘无籽沙糖橘’CrUBC2蛋白对自交花粉管生长有明显抑制作用,但对异交花粉管生长无影响,这可能与该蛋白参与S-RNase泛素化并导致异交亲和有关。; 吴秀兰李桂花唐文武; 关键词：自交不亲和基因克隆功能分析

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