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一种表达Rv0222的重组耻垢分枝杆菌及其应用: 本发明公开了一种表达Rv0222的重组耻垢分枝杆菌及其应用，属于生物技术领域。所述重组耻垢分枝杆菌是将Rv0222基因转入耻垢分枝杆菌中构建而成，所述Rv0222基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。本发明通过穿...; 陈宗海

一种产烟酸的超级重组耻垢分枝杆菌及其构建方法: 本发明提供了一种产烟酸的超级重组耻垢分枝杆菌的构建方法，包括步骤：1）构建质粒pMHS‑NrtR<Sub>ms</Sub>；2）构建质粒pHAGE‑NrtR<Sub>ms</Sub>；3）制备重组TM4噬菌体；4）构建n...; 詹玉心吴泽承周亚凤王绪德

一种敲除毒力相关基因的重组耻垢分枝杆菌菌株及其应用: 本发明涉及一种敲除毒力相关基因Ms esat‑6的重组耻垢分枝杆菌菌株，简称rMs‑ΔE6，其保藏编号为：CCTCC M 2021462。本发明还涉及上述重组耻垢分枝杆菌rMs‑ΔE6用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂...; 柏银兰张芳琳宁唤唤梁璇康健任瑞白鹭谢燕玲彭钰君张婧瑶

重组耻垢分枝杆菌MS_PE16的构建及其生物学特性研究: 2023年; 为探究牛分枝杆菌(M.bovis)PE/PPE家族成员PE16蛋白的生物学功能,本研究以M.bovis基因组DNA为模板扩增PE16基因片段并克隆至pMN437载体中,构建原核表达质粒pMN437-PE16,经PCR和测序鉴定正确后将该重组质粒及对照质粒PMS2电转入耻垢分枝杆菌中构建重组耻垢分枝杆菌MS_PE16及对照重组耻垢分枝杆菌MS_Vec。经western blot鉴定结果显示,重组耻垢分枝杆菌中PE16在55 ku左右正确表达,而MS_Vec则无该特异性条带。对MS_PE16及MS_Vec进行生长曲线测定,并利用倒置显微镜观察MS_PE16及MS_Vec的菌落形态;将培养至对数生长期的MS_PE16及MS_Vec分别以MOI 10感染人白血病单核细胞(THP-1细胞),感染后0(感染4 h后经庆大霉素处理2 h,此时计为0)、24 h、48 h时采用平板计数法检测胞内菌数量;细菌感染后24 h和48 h时收集各组细胞培养上清,利用ELISA试剂盒检测各组细胞IL-6、TNF-α、IL-1β、IFN-β的表达分泌水平。生长曲线测定结果显示,PE16对分枝杆菌的生长无显著影响;菌落形态观察结果显示,MS_PE16与MS_Vec的菌落形态无明显区别;胞内活菌数量检测结果显示,细菌感染后0和24 h,MS_PE16在THP-1细胞中的数量极显著低于MS_Vec(P<0.01),但在感染后48 h,MS_PE16在THP-1细胞中的存活率极显著高于MS_Vec组在THP-1细胞中的存活率(P<0.001);细胞因子检测结果显示,MS_PE16感染组细胞中IFN-β的分泌水平极显著高于MS_Vec组(P<0.01)。上述结果表明PE16对分枝杆菌的生长和菌落形态均无显著影响,但其可提高分枝杆菌在巨噬细胞内的存活率,且可促进巨噬细胞中IFN-β的分泌水平。本研究初步揭示了分枝杆菌PE16蛋白的功能,为M.bovis感染机制的进一步研究提供了实验数据。; 毕斯琪杨可徐阿慧宋厚辉; 关键词：牛分枝杆菌免疫反应

一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌的构建及作为肿瘤疫苗和免疫佐剂的应用: 本发明提供一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌，所述免疫活化型重组耻垢分枝杆菌为胞内表达anti‑PD‑L1scfv与IL‑15融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗，该疫苗以耻垢分枝杆菌为宿主细胞，转染宿主细胞的表达载体为包含ant...; 刘宝瑞梅义

重组耻垢分枝杆菌Ms_Rv1767的生物学特性分析及其对巨噬细胞影响的初步研究: 结核病(Tuberculosis,Tb)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的一种人类和动物传染疾病。病原菌通过气溶胶的形式在人畜之间传播。巨噬细胞是分枝杆菌主要的目的...; 徐金彪; 关键词：结核分枝杆菌异源表达 RAW264.7细胞

表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立被引量：2: 2022年; 目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,获得EGFP的编码基因,将扩增产物克隆到载体pALACE上,建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中,通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后涂片观察,并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞,观察是否有GFP表达。结果正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌,证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达,并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。; 李敏英王楚彤袁美丽卢思彤钱中清李柏青许涛汪洪涛; 关键词：耻垢分枝杆菌结核病

表达促凋亡蛋白Bid的重组耻垢分枝杆菌的构建及其对巨噬细胞凋亡的影响: 2022年; 目的构建表达并分泌外源性促凋亡蛋白Bid的重组耻垢分枝杆菌,并研究其对小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响。方法运用生物信息技术对小鼠Bid蛋白质的理化性质、分泌属性、保守结构域及蛋白相互作用网络等进行分析,应用无缝克隆技术及传统酶切酶连方式构建pMV261-ASP(BamHI)-10His、pMV261-ASP(BamHI)-Bid-10His、pMV261-ASP(EcoRI)-10His、pMV261-ASP(EcoRI)-Bid-10His重组质粒,并电转化入耻垢分枝杆菌;通过BCA蛋白定量及免疫印迹技术分析蛋白表达情况,采用AnnexinV-FITC/PI双染法流式检测Bid重组耻垢分枝杆菌对RAW264.7小鼠巨噬细胞凋亡的影响。结果小鼠Bid蛋白是一种等电点为4.80的亲水性蛋白质,其中亮氨酸所占比例最高,为11.3%,色氨酸含量最低,为0.5%;二级结构中,α-螺旋(Hh)、无规则卷曲(Cc)、β-折叠(Ee)、β-转角(Tt)所占比例依次为65.13%、27.69%、4.10%、3.08%;Bid蛋白不具有跨膜结构域及信号肽,属于非分泌性蛋白质,具有死亡保守结构域,可与Caspase8、Bcl-2、Granzyme B等凋亡相关蛋白发生相互作用;本次构建的ASP-Bid重组耻垢分枝杆菌可以表达并分泌目标蛋白,且可增强RAW264.7小鼠巨噬细胞凋亡的比例。结论表达外源基因Bid的重组耻垢分枝杆菌可以促进巨噬细胞凋亡发生,这可为新型结核病预防疫苗的研发提供新的思路与技术。; 逄亚宁杨国平孟余吴利先李光华; 关键词：结核病耻垢分枝杆菌信号肽 BID

表达Ag85B重组耻垢分枝杆菌的构建及其对Mtb感染小鼠免疫治疗的初步研究: 结核病(tuberculosis,TB)是一种在全世界广泛流传的慢性传染病,是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的。卡介苗(Bacillus Calmette-Guer...; 梁璇; 关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌 AG85B 免疫治疗

一种敲除毒力相关基因的重组耻垢分枝杆菌菌株及其应用: 本发明涉及一种敲除毒力相关基因Ms esat‑6的重组耻垢分枝杆菌菌株，简称rMs‑ΔE6，其保藏编号为：CCTCC M 2021462。本发明还涉及上述重组耻垢分枝杆菌rMs‑ΔE6用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂...; 柏银兰张芳琳宁唤唤梁璇康健任瑞白鹭谢燕玲彭钰君张婧瑶; 文献传递

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