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禽流感病毒M基因的重组慢病毒构建: 2024年; 旨在建立针对禽流感病毒(AIV)的实验室快速分子检测方法。构建重组慢病毒作为分子检测方法中的阳性对照品,采用PCR扩增技术获得AIV M基因的保守区片段,并构建pLVX-M-IRES-ZsGreen1重组慢病毒穿梭载体;将鉴定成功的重组穿梭质粒与骨架质粒pMD2.G和psPAX2共转染293T细胞,获得携带AIV M基因保守区的重组慢病毒;将重组慢病毒感染293T细胞,观察其荧光表达情况,收集、浓缩病毒液并测定其滴度;用AIV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法检测M基因。结果表明:携带AIV M基因的重组慢病毒成功拯救,且其病毒滴度高、安全性强,可作为分子检测方法的阳性对照标准品。综上,本研究成功构建了AIV M基因的重组慢病毒,可高效包装出含有M基因保守区的慢病毒颗粒,为后续AIV分子检测试剂盒的研制提供参考。; 潘俊慧王素春禹兰平周凯钰太魏世萌祁倩李超隋金钰康京丽康京丽; 关键词：禽流感病毒 M基因 293T细胞重组慢病毒

一种重组质粒、重组慢病毒载体、稳转细胞系及其应用: 本发明提供了一种重组质粒、重组慢病毒载体、稳转细胞系及其应用，所述重组质粒中含有如SEQ ID NO:1所示的去除部分胞内域后的FcγRIIC核苷酸序列，所述重组慢病毒载体由重组质粒转染293T细胞所得，所述稳转细胞系由...; 孙健红陈志方邓鑫澳韦婵娟徐承晨

重组慢病毒载体和293T-CD3细胞系及其构建方法与应用: 本发明提供一种重组慢病毒载体和293T‑CD3细胞系及其构建方法与应用。该重组慢病毒载体包含CD3D、CD3G、CD3E和CD247表达盒；其中，CD3D、CD3G、CD3E和CD247各分子间以2A肽编码核酸分子相连，...; 蒋栋谢兴旺史云强王雪艳王江华

一种表达单元、重组慢病毒表达载体、重组慢病毒及其制备方法和应用: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种表达单元、重组慢病毒表达载体、重组慢病毒及其制备方法和应用。本发明合成了人源PIRT基因启动子序列和兔源RFT‑I最小启动子序列，并将切割SNARE的蛋白酶编码序列分别插入到这两个启动...; 王家富王婉至孟疆辉窦雨

重组慢病毒Lenti-shRRP15的制备和特异性应用杀伤神经胶质瘤细胞: 本发明涉及重组慢病毒Lenti‑shRRP15的制备和特异性应用杀伤神经胶质瘤细胞。以一种siRNA序列为靶点的shRRP15引物进行化学合成，将引物等比例混和退火后，得到shRRP15序列，使用引物对慢病毒质粒pLKO...; 朱长军熊廷川王庐宇

一种猪氨肽酶N重组慢病毒表达载体、重组慢病毒、重组细胞及其制备方法和应用: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种猪氨肽酶N（pAPN）重组慢病毒表达载体、重组慢病毒、重组细胞及其制备方法和应用。通过扩增猪小肠组织中的pAPN基因，利用限制性内切酶（BamHI、NotI）同源位点克隆到慢病毒载体中...; 陈秋勇周伦江王隆柏陈如敬吴学敏车勇良

重组慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质构建转基因组织工程材料: 2025年; 背景:缺损组织的修复重建受限于自体或异体可替代移植材料的来源问题而导致临床应用受限,转基因干细胞和组织工程材料研究开辟了新的治疗思路。目的:探究增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞在体外的生物学特性以及与脱钙骨基质体外构建转基因组织工程材料的生物矿化特性。方法:细胞贴壁及密度离心法获得兔骨髓间充质干细胞,增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒以感染复数为100转染第5代兔骨髓间充质干细胞,体外观察转染细胞与未转染细胞的增殖能力、细胞表型、细胞周期以及成骨诱导后碱性磷酸酶、Runx2、骨钙素表达的差异;增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒转染骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质在体外构建转基因组织工程材料,对其进行扫描电镜观察及元素能谱分析。结果与结论:增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞后,在转染24,48 h细胞增殖较未转染细胞缓慢(P <0.05);在转染72 h后,细胞表型未发生变异,细胞周期、细胞增殖能力以及成骨诱导后碱性磷酸酶、Runx2、骨钙素表达量与未转染细胞无明显差异(P> 0.05);增强型绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞在脱钙骨基质支架上有较好的生物相容性,根据荧光表达强度推测目的基因在2周左右发挥最大生物学功能,且出现了钙磷矿化物沉积,体现出优越的生物矿化特性。; 宁寅宽刘林志周次腊隆宇斌; 关键词：重组慢病毒载体骨髓间充质干细胞基因治疗生物学特性

一种稳定表达FGF8基因的重组慢病毒表达质粒、重组慢病毒表达载体以及A549细胞系及应用: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种稳定性表达FGF8基因的重组慢病毒表达质粒、重组慢病毒表达载体以及A549细胞系及应用。本发明以FGF8基因为目的基因，将其通过基因工程成功建立了稳定性表达FGF8基因的A549细...; 于志君魏冉程凯慧

LAMB3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定: 2024年; 目的构建含有LAMB3基因的慢病毒表达载体,并感染HaCaT细胞,评价重组慢病毒载体提高LAMB3基因及蛋白表达的效果。方法提取皮肤组织的总RNA,通过反转录方法扩增LAMB3基因,将其连入慢病毒载体pCDH-CMV中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并进行LAMB3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,浓缩纯化病毒液,感染HaCaT细胞并提取细胞的总蛋白和总RNA,用qPCR方法检测LAMB3 mRNA在感染病毒的HaCaT细胞中的表达,通过Western blot方法检测LAMB3蛋白在感染病毒的HaCaT细胞中的表达。结果构建的慢病毒载体pCDH-CMV-LAMB3经测序分析证实基因序列正确。包装后的慢病毒滴度为108PFU/mL。qPCR方法检测到感染病毒的HaCaT细胞中,LAMB3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的HaCaT细胞中,LAMB3过表达组与空白对照组相比,LAMB3蛋白表达量显著增加,LAMB3蛋白在翻译水平有表达。结论本研究构建的携带LAMB3基因的重组慢病毒能够感染HaCaT细胞,并使其LAMB3基因及蛋白含量增加。; 何小蓉黄彬彬吴小末; 关键词：慢病毒载体克隆 HACAT细胞

在无血清悬浮细胞培养系统中生产重组慢病毒载体的可扩大的制造方法: 提供用于以满足人类基因治疗的预期需要的规模制备高纯度rLV载体制剂的方法。; 曲光约翰·弗雷泽·莱特

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