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南极莫氏黑粉菌热激蛋白70家族启动子鉴定及活性比较: 2024年; 【背景】南极莫氏黑粉菌(Moesziomyces antarcticus)由于能够产生优良的生物表面活性剂和脂酶而被深入研究,但目前仍缺乏遗传操作相关的基因表达元件。【目的】检测南极莫氏黑粉菌热激蛋白70超家族全部7个基因的启动子表达活性,明确该菌中不同热激蛋白70家族成员的启动子活性差异,并筛选出可用于调控南极莫氏黑粉菌基因表达的强启动子。【方法】通过基因组数据库获得南极莫氏黑粉菌JCM10317菌株中7个热激蛋白70家族成员的基因信息,利用生物信息学方法进行热激蛋白70家族进化分析并预测热激蛋白70启动子(P_(Hsp70))序列中的关键顺式作用元件,然后构建7个热激蛋白70启动子连接增强型绿色荧光蛋白基因的重组表达载体,通过测定阳性转化子荧光值和荧光显微观察比较不同热激蛋白70家族成员启动子的活性差异。【结果】蛋白进化分析表明7个热激蛋白70家族成员分别属于不同亚家族,并且各成员启动子中的顺式作用元件种类和数量也具有明显差异。此外,以P_(Hsp701)、P_(Hsp702)、P_(Hsp703)、P_(Hsp704)、P_(Hsp705)、P_(Hsp706)和P_(Hsp707)构建的重组质粒转化菌株BDH3-1所获得的阳性转化子平均荧光值分别为对照的12.8、1.6、2.9、5.8、4.6、5.0和1.5倍,与荧光显微观察结果一致。【结论】根据生物信息学分析及绿色荧光蛋白表达结果发现,南极莫氏黑粉菌热激蛋白70家族不同成员间的启动子活性差异显著,其中PHsp701的活性最高,是南极莫氏黑粉菌中的强启动子,P_(Hsp704)、P_(Hsp705)、P_(Hsp706)启动子活性次之,可作为备选启动子用于后续研究。; 张聪郭利桃董国云李毅李新文张政兵林宇丰侯春生李智敏; 关键词：启动子活性增强型绿色荧光蛋白

耐寒性状相关的南美白对虾热激蛋白70分子标记及应用: 本发明公开了一种耐寒性状相关的南美白对虾热激蛋白70分子标记，其包括位于序列1 heat shock cognate 70基因序列上的分子标记A～F，以及位于序列3 hsp70‑binding protein 1基因序列...; 彭敏赵永贞刘青云李强勇张彬陈田聪杨春玲朱威霖洪传远王卉李旻

镉胁迫花边星齿蛉幼虫转录组分析及热激蛋白70/90家族基因表达模式研究: 人类活动导致的重金属污染严重威胁淡水生态系统安全。水生昆虫个体小、种类多,分布广,是淡水生态系统稳定的基石,同时也是遭受重金属污染危害最严重的类群之一。目前武陵山区正面临着较为严重的重金属镉污染的生态风险,但重金属镉胁迫...; 文法胜; 关键词：镉胁迫热激蛋白基因表达水平

美国白蛾热激蛋白70基因的鉴定及功能分析被引量：2: 2021年; 【目的】探究热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因在美国白蛾Hyphantria cunea抵御高温胁迫过程中的作用,为揭示美国白蛾的扩散机制以及预测潜在分布区提供理论支撑。【方法】利用PCR技术克隆美国白蛾HSP70基因,并进行生物信息学分析;利用qPCR技术检测新蜕皮的美国白蛾4龄第2天幼虫在25,30,35和40℃处理下HSP70基因的表达特性;构建美国白蛾HSP70的原核表达载体,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21感受态细胞中诱导表达该蛋白,利用Ni2+-His柱纯化蛋白,并通过Western blot验证该蛋白;利用体外实验测定原核表达获得的重组蛋白在高温胁迫下的ATP酶活性。【结果】克隆获得美国白蛾2条HSP70基因HcHSP70(GenBank登录号:MT995848)和HcHSC70(GenBank登录号:MT261583),其ORF长度分别为1917和2061 bp,分别编码637和687个氨基酸,分子质量分别约为69.66和74.96 kD,等电点分别为5.90和5.96;氨基酸序列结构均含有3个高度保守的区域GIDLGTTYS,IFDLGGGTFDVSIL和VGGSTRIPKVQ,符合热激蛋白70家族的特征;蛋白三维结构均由N端ATPase功能域和C端底物结合功能域所组成。系统进化树显示HcHSP70与鳞翅目HSP70家族其他成员聚为一支,而HcHSC70与鳞翅目HSC70家族的其他成员聚为另一支。qPCR结果表明,新蜕皮的美国白蛾4龄第2天幼虫在热胁迫下HcHSP70的相对表达量显著上调,且在35℃处理2 h下达到峰值,而热胁迫下HcHSC70的表达响应较微弱。成功构建了HcHSP70的原核表达载体并在体外诱导表达。纯化后的重组蛋白HcHSP70具备ATPase活性,且在高温胁迫下酶活性稳定。【结论】本研究克隆获得美国白蛾2条HSP70基因HcHSP70和HcHSC70,明确了两条基因在高温处理下的表达特性;成功对美国白蛾HcHSP70进行原核表达及纯化,并证明重组蛋白HcHSP70在高温下具有稳定的ATPase活性,推测其在美国白蛾应对高温胁迫中发挥着重要作用。; 乔恒李慧耿薏舒赵旭东于晓航郝德君; 关键词：美国白蛾热激蛋白70 高温胁迫原核表达分子伴侣

菜粉蝶热激蛋白70(HSP70)基因的分子特性及其对杀虫剂胁迫的响应被引量：1: 2021年; 【目的】明确菜粉蝶Pieris rapae热激蛋白70(HSP70)基因的分子特性及其对杀虫剂胁迫的响应,为探索菜粉蝶HSP70基因在抵御杀虫剂胁迫中的功能提供前期基础。【方法】利用同源检索方法,从菜粉蝶转录组数据中鉴定HSP70基因;使用生物信息学方法分析HSP70基因的分子特性;采用实时荧光定量PCR技术分析HSP70基因在菜粉蝶不同发育阶段(2-5龄幼虫、蛹和雌雄成虫)、4龄幼虫不同组织(中肠、马氏管、脂肪体和体壁)以及LD_(20)剂量高效氯氟氰菊酯(0.12 ng/μL)和氯虫苯甲酰胺(1.04 ng/μL)胁迫下4龄幼虫体内的表达谱。【结果】从菜粉蝶转录组中鉴定了3个HSP70基因(PrHsp70-1,PrHsp70-2和PrHsp70-3)(GenBank登录号分别为MW691114,MW691115和MW691116),它们分别编码628,630和653个氨基酸,分子量分别为68.7,69.2和71.7 kD。生物信息学分析结果表明,3个PrHSP70蛋白均为胞质蛋白,且均含有HSP70家族的特征序列。PrHsp70-1和PrHsp70-2无内含子,而PrHsp70-3含有1个内含子。随着幼虫龄期的增加,PrHsp70-1和PrHsp70-2的表达量也不断上调,但在蛹期和成虫期下调;PrHsp70-3在供试的不同发育阶段样本中的表达量无显著差异。PrHsp70-1高量表达于幼虫脂肪体,PrHsp70-2高量表达于幼虫中肠,PrHsp70-3在幼虫体壁和脂肪体中表达量均较高。LD_(20)剂量高效氯氟氰菊酯和氯虫苯甲酰胺均能诱导3个PrHsp70基因显著上调表达,但不同基因的响应速度有差异;此外,LD_(20)剂量高效氯氟氰菊酯处理24 h后,PrHsp70-3显著下调表达。【结论】PrHsp70基因可能在菜粉蝶生长发育以及抵御杀虫剂胁迫中均有重要作用。; 丁朝阳赵乐刘苏李茂业; 关键词：菜粉蝶热激蛋白高效氯氟氰菊酯氯虫苯甲酰胺

磷脂酶Dδ与热激蛋白70相互作用及其调控植物耐热性机制的研究: 植物的生长发育会受到各种非生物胁迫，如高温、干旱、盐害和重金属污染等，其中高温胁迫已经成为限制农作物生产力的主要非生物胁迫之一。高温胁迫下，植物体内诱导产生大量的热激蛋白(heatshockprotein，HSP)，如小...; 宋萍; 关键词：热激蛋白70

普通小麦热激蛋白70基因家族分析及TaHsp70-47的克隆: 小麦(Triticum aestivum L.)是我国重要的粮食作物之一。近年来,随着温室气体增加,全球气温升高,高温给小麦产量带来了越来越严重的影响。因此,挖掘小麦抗热相关基因,培育耐热小麦新品种,是当前研究的重要内容...; 刘阳; 关键词：非生物胁迫基因克隆; 文献传递

花楸树热激蛋白70基因的克隆及表达分析被引量：7: 2019年; 为了探究花楸树应答高温胁迫的分子机制,本研究克隆了花楸树热激蛋白70(HSP70)家族中的一个基因,命名为SpHSP70-1。SpHSP70-1开放阅读框全长为2 556 bp,编码851个氨基酸,蛋白等电点为5.08,分子量为93.875 kD,gDNA全长为3 815 bp,含有8个内含子。与同源性较高的物种及模式植物的热激蛋白70进行同源性分析及系统发生树的构建,发现SpHSP70-1与苹果、白梨的亲缘及进化关系最密切,其次同源性较高的也均为蔷薇科植物。蛋白结构域分析显示SpHSP70-1在N端含有丰富的SBD、NBD以及热激蛋白70互作位点,C端结构域可变性较大,为C端亚结构域。三级结构预测其为单体蛋白,没有配体。为了探究其耐热机制及表达模式,对42℃处理下的花楸树叶片及花楸树不同发育时期的各器官组织进行qRT-PCR检测,结果显示:花楸树叶片在热处理24 h内,SpHSP70-1均有几十倍至几百倍的高表达变化,在热处理1 h时,表达量达到最高,而后开始显著下降;SpHSP70-1在不同时期各器官组织当中均有表达,在根中表达量最高,花期时各花器官的表达量较低。本研究结果旨在为今后花楸树响应非生物胁迫,尤其是热胁迫的分子机制研究提供基础。; 刘聪聪张泽关雪莲裴鑫郑健; 关键词：热激蛋白70 生物信息学

热激蛋白70在自发性早产有无伴发组织学绒毛膜羊膜炎中表达差异的对比分析被引量：1: 2019年; 目的:分析热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)在自发性早产(spontaneous preterm birth,SPB)有无伴发组织学绒毛膜羊膜炎(histologic chorioamnionitis,HCA)患者表达差异情况及两者关联性。方法:选择2014年1月-2018年6月北部战区总医院收治的86例SPB临产患者,以胎膜组织的病理结果进一步分为SPB伴发HCA组(有HCA组,39例)与SPB未伴发HCA组(无HCA组,47例);另外选取同期住院正常足月分娩者50例作为对照组。统计比较各组脐静脉血、外周静脉血、胎膜组织的HSP70浓度,以及HSP70 mRNA在胎膜组织中水平。结果:(1)有HCA组的HSP70浓度[外周静脉血(1.63±0.25)ng/mL、脐静脉血(0.97±0.10)ng/mL、胎膜组织(1.03±0.07)]较无HCA组[(1.27±0.20)ng/mL、(0.76±0.07)ng/mL、(0.88±0.05)]均明显增高,同时也均较对照组[(0.78±0.10)ng/mL、(0.55±0.08)ng/mL、(0.51±0.03)]均明显增高(F=15.117、11.148、13.624,P<0.05)。(2)有HCA组的新生儿败血症(15.4%)较无HCA组(0)、对照组(0)均明显增高(X^2=9.638,P<0.05)。(3)有HCA组的外周静脉血HSP70表达与脐静脉血、胎膜组织HSP70表达有明显正相关性(r=0.889、0.931,P<0.05)。结论:SPB并存HCA时,HSP70在脐静脉血、外周静脉血、胎膜组织中的表达均明显增高,HSP70可能与SPB以及新生儿败血症的发生相关。; 宋秀玲葛静闫硕杨楠; 关键词：早产绒毛膜羊膜炎热激蛋白70 新生儿

草鱼热激蛋白70(HSP70)的细胞因子功能及参与炎症反应调节的研究: 热激蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)是一类维持细胞稳态的高度保守的蛋白超家族。哺乳动物研究表明,HSP70,一种被诱导的分子量为72 kDa左右的热激蛋白,不仅作为分子伴侣在蛋白折叠、跨膜运输和转...; 张安英; 关键词：热激蛋白70 草鱼细胞因子炎症反应; 文献传递

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