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大豆免疫负调控基因6-磷酸海藻GmTPS6、其编码蛋白及应用
本发明公开了大豆免疫负调控基因6‑磷酸海藻GmTPS6、其编码蛋白及应用,属于作物遗传育种技术领域,本发明要解决的技术问题是:如何提高大豆对大豆疫霉的抗性。为解决上述技术问题,本发明提供蛋白质或调控基因表达的物质或...
乔永利朱晓果房迪李蝶张佳宁
一种海藻突变体及其应用
本发明涉及一种海藻突变体,属于基因工程技术领域。所述海藻突变体是对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的海藻的第201位和/或第351位的氨基酸进行定点突变获得的。本发明在天然海藻的基础上,通过...
张建涛张建波马春艳李志敏林玉房鸣
一种海藻突变体及其制备和应用
本发明属于基因工程和工程技术领域,公开了一种海藻突变体,该海藻突变体是将海藻亲本第160、192、216、228或234位氨基酸中的一个进行点突变得到的;具体是通过设计定点突变的突变引物,以携带海藻...
刘伟杰景栋徐明
粘细菌Myxococcus sp.CYD-1海藻基因克隆及学特性分析被引量:1
2023年
【目的】海藻(trehalose synthase,EC.5.4.99.16)可通过转苷作用将麦芽转化成为海藻,该反应仅需一步,且所用原料低廉,在法生产海藻上显示出一定的应用潜力。本文以粘细菌Myxococcus sp.CYD-1为材料,挖掘新的海藻资源。【方法】以菌株CYD-1基因组DNA为模板,使用加尾PCR的方法克隆编码海藻的基因MCTs,构建含有组氨酸标签的重组表达载体,并将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。重组蛋白经Ni^(2+)-NTA纯化,以麦芽为底物研究其学性质,包括最适温度、最适pH、温度和pH稳定性及金属离子和抑制剂的影响。【结果】从菌株CYD-1基因组中克隆到一个编码海藻的基因MCTs。MCTs全长1659 bp,编码一个552个氨基酸的蛋白,分子量大小为65 kU。氨基酸序列分析表明MCTs与来源于Myxococcus sp.V11的海藻相似性为92.36%,与其他已报道的海藻有较大差异。MCTs具有高度保守的基序202DAVPYL207,244EANQ247和307RNHDEL312,以及活性中心三联体Asp202-Glu244-Asp310,三维建模结果显示MCTs的催化结构域具有典型的(α/β)8桶状结构,表明MCTs归属于苷水解GH13家族。重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量可溶性表达后,通过Ni^(2+)-NTA将目的蛋白纯化至电泳纯。重组rMCTs最适反应温度为40℃,最适反应pH为6.5,最大比活力为105.6 U/mg。重组rMCTs在30℃下处理4 h,残留活为50%,但在65℃下处理1.5 h活力丧失。重组rMCTs在pH 5.0~8.0范围内有活性,在pH 6.0~7.5处理12 h活力稳定。1 mmol/L Ca^(2+)对重组rMCTs有轻微的激活作用,Co^(2+)、Fe^(3+)、Cu^(2+)对重组rMCTs有抑制作用,其余金属离子对活力无影响。甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂和SDS对重组rMCTs有强烈的抑制作用,TritonX-100对rMCTs活力无显著影响。【结论】MCTs具有潜在的应用价值,丰富了海藻资源。
况丹黄奕晴徐嘉周昊王飞
关键词:海藻糖合酶基因克隆酶学特性
海藻枯草芽孢杆菌破壁及转化工艺研究
2023年
以细胞破碎率与海藻转化率为考察指标,确定发酵液破壁的最佳方式与参数。结果表明,采取高压均质机1000bar破壁两次破壁效果及海藻得率最佳,细胞破碎率可达99.32%,海藻转化率可达41.46%,较初始超声波破壁分别提升了12.31%,7.52%。采取单因素法,分别优化单法转化海藻的pH、温度,通过延长转化时间,监测转化过程中海藻得率的变化,确定不同转化时间得率的变化趋势,确定最佳的转化周期,并对胞内胞外转化的占比进行研究。结果显示,最佳转化条件为转化pH7.8,转化温度35℃,周期28h,在该工艺条件下进行转化,海藻浓度可达68.63g/L,较初始条件提升了41.88%,转化率可达48.16%,较未优化前提升了14.22%。
连战王松江郭传庄隋松森吕志飞李小双孙瑞成王建彬
关键词:海藻糖海藻糖合酶转化率
理性设计和定点突变对提高海藻TreSI热稳定性的影响
2023年
[目的]来源于黏细菌Myxococcus sp.V11的海藻(trehalose synthase,EC 5.4.99.16)TreSI可通过转苷作用将麦芽转化成为海藻,在法生产海藻上有很高的应用前景,其热稳定性是制约该工业应用的关键。本文旨在通过定点突变对TreSI相关氨基酸残基进行改造,以期获得热稳定性强的突变子,提高其应用潜力。[方法]使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1对TreSI每个氨基酸突变后的去折叠自由能变化(ΔΔG)进行初步预测,以SDM(site directed mutator)和mCSM(mutation cutoff scanning matrix)以及两者联(Duet)进行预测。用重叠延伸PCR法构建11个海藻突变体,经大肠杆菌表达和蛋白纯化后,对其学特性进行表征。[结果]成功筛选到2个热稳定性提高的突变子。突变子R149L、N193E的比活与野生型无显著差异,且最适pH值和最适反应温度也未发生改变;R149L、N193E在50℃处理1 h的残余活性为野生型的1.37和2.50倍;在60℃处理1 h的残余活性为野生型的2.41和4.32倍。[结论]本研究利用PoPMuSiC结SDM、mCSM模拟的设计策略提高了TreSI的耐热性,为工业应用提供了新的资源,也为其他工业的定向改造提供了参考。
张丽霞黄奕晴吴嘉蕾李元顺王飞
关键词:海藻糖合酶定点突变热稳定性
一种海藻突变体及其应用
本发明涉及一种海藻突变体,属于基因工程技术领域。所述海藻突变体是对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的海藻的第201位和/或第351位的氨基酸进行定点突变获得的。本发明在天然海藻的基础上,通过...
张建涛张建波马春艳李志敏林玉房鸣
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一种固定化海藻催化麦芽海藻的方法
本发明公开了一种固定化海藻催化麦芽海藻的方法,本发明将海藻通过双重吸附‑交联法固定于介孔分子筛SBA‑15上,用于催化麦芽海藻,固定化方法简单、时间短、无污染、条件温和,固定化后的海藻pH稳...
于令君郝云飞李莉
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聚丙烯腈膜固定化海藻催化麦芽海藻的方法
本发明公开了聚丙烯腈膜固定化海藻催化麦芽海藻的方法。本发明以聚丙烯腈膜为载体,采用吸附法固定化海藻,用于催化麦芽海藻,载体材料制备方法简单、操作容易、易于控制、成本低、可规模化生产且固定化条件简单...
楼志华丁红辉刘翔周立唐谋
文献传递
一种谷氨酸棒杆菌利用EF-Tu启动子表达海藻的方法和应用
本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌利用EF‑Tu启动子表达海藻的方法和应用,通过将谷氨酸棒杆菌ATCC13032中翻译延伸因子EF‑Tu的启动子P<Sub>EF‑Tu</Sub>融于谷氨酸棒杆菌ATCC13032海藻...
满在伟崔慧慧刘典典陈一鸣蒋心怡郭静
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相关作者

王瑞明
作品数:481被引量:1,352H指数:19
供职机构:齐鲁工业大学
研究主题:海藻糖 海藻糖合酶 工程菌 10-HDA 核苷酸序列
王腾飞
作品数:207被引量:164H指数:8
供职机构:齐鲁工业大学
研究主题:海藻糖 海藻糖合酶 海藻糖合成酶 10-HDA 表达基因
张峻
作品数:82被引量:496H指数:11
供职机构:天津市农业科学院
研究主题:海藻糖合酶 海藻糖 壳聚糖 亚栖热菌 交联酶聚集体
李明春
作品数:222被引量:838H指数:19
供职机构:南开大学
研究主题:白念珠菌 脂肪酸脱氢酶 脂肪酸脱氢酶基因 Γ-亚麻酸 深黄被孢霉
苏静
作品数:70被引量:6H指数:2
供职机构:齐鲁工业大学
研究主题:海藻糖合酶 工程菌 热带假丝酵母 大肠杆菌工程菌 癸酸