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2023-2024年流感监测季北京市乙型Victoria系流感病毒血凝素基因特性和抗原性分析: 2024年; 目的了解2023-2024年流感监测季北京市乙型Victoria系流感病毒(BV)的血凝素(hemagglutinin,HA)基因特性、抗原性及与流感疫苗组分株的匹配性。方法采集2023—2024年流感监测季流感样病例(influenza like-illness,ILI)咽拭子样本,经MDCK细胞或鸡胚培养分离流感病毒,提取病毒核酸后测序。应用Mega5.0进行病毒HA基因的核苷酸和氨基酸变异分析,采用maximum likelihood方法构建HA基因的遗传进化树,在线预测N-糖基化位点。SWISS-MODEL同源建模,建立BV毒株HA的蛋白质三维空间模拟图。通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验,进行毒株的抗原性分析。结果随机抽取本年度BV分离毒株54株,提取核酸后测序获得HA基因全长序列。与本年度的疫苗组分BV株(B/Austria/1359417/2021)HA基因相比较,这54株均有3个氨基酸序列替换,涉及2个不同的抗原决定簇。遗传进化树分析显示:所有毒株均位于Clade 1A.3a.2分支,与2023—2024年度疫苗组分BV株在同一分支。抗原性分析结果显示:54株均为疫苗组分BV株的类似株。结论2023—2024年流感监测季北京市人群中BV流行毒株以Clade 1A.3a.2进化分支为主要流行株。本监测季BV流行株与疫苗BV组分的抗原匹配性较高。; 卢桂兰赵佳琛石伟先张莉刘医萌冯兆民孙瑛张代涛彭晓旻; 关键词：乙型流感病毒血凝素基因抗原性分析

番鸭细小病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析: 2024年; 为原核表达番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)VP3蛋白,评价MDPV VP3蛋白在番鸭中的抗原性。将MDPV VP3基因按照大肠杆菌密码子偏嗜性优化后,克隆至原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导表达和His镍柱纯化后,获得VP3纯化蛋白,并进行SDS-PAGE蛋白电泳和western blots鉴定。通过透射电镜观察MDPV VP3蛋白在大肠杆菌中形成病毒样颗粒的情况,以纯化后的VP3蛋白免疫种番鸭,评价MDPV VP3蛋白的抗原性。结果显示,MDPVVP3蛋白可在大肠杆菌BL21(DE3)中以沉淀包涵体的形式高效表达,SDS-PAGE和Western blots试验结果显示VP3目的条带大小为60kDa左右,与预期相符,纯化后VP3蛋白浓度为5.64mg/mL。通过透射电镜,可在VP3蛋白表达上清样品中观察到直径约为20nm的颗粒样物质,表明单独表达MDPV VP3蛋白可在大肠杆菌中自组装形成病毒样颗粒。将制备的VP3蛋白免疫种番鸭,利用间接ELISA试验检测番鸭血清中特异性抗体水平,免疫后14d,OD450值为0.75~0.90,表明制备的VP3蛋白抗原性良好。本试验在大肠杆菌中成功表达纯化MDPVVP3蛋白,具有良好的抗原性,具备研制MDPV亚单位疫苗的开发前景,本研究可为进一步评MDPVVP3蛋白的免疫保护效果提供前期基础。; 刘郁夫萧碧扬董楠夏兆伦申翰钦陈瑞爱; 关键词：番鸭细小病毒 VP3 原核表达抗原性

绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征及抗原性分析: 2024年; 为研究绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征、抗原性及其遗传进化关系,采用PCR技术对绵羊肺源大肠杆菌XJ10菌株的cyaA基因进行扩增、克隆并测序,应用定量PCR检测cyaA基因在不同培养阶段的mRNA表达量,利用在线软件对其进行编码蛋白分子特征、抗原性及其遗传进化分析。结果显示,cyaA基因全长2547 bp,编码848个氨基酸;cyaA基因在细菌对数期的mRNA表达量最高,其次是稳定期及迟缓期,在衰亡期的mRNA表达量最低;氨基酸序列分析发现,分子式为C_(4389)H_(6759)N_(1193)O_(1273)S_(30),理论分子质量为97.57 ku,理论等电点为5.82,为酸性亲水性蛋白,稳定性较低;二级结构中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-折叠所占比例分别为42.81%、39.03%、14.27%和3.89%。AC蛋白无信号肽与跨膜区,保守结构域位于1~848位氨基酸,属于腺苷酸环化酶超家族,具有14个开放阅读框,存在81个磷酸化位点。AC蛋白B细胞优势表位共16个,分别位于第44~51、61~65、248~250、259~267、296~304、355~366、436~439、456~456、476~481、489~490、540~559、589~597、634~640、717~722、766~773、806~806区段;遗传进化分析发现大肠杆菌XJ10菌株AC蛋白与志贺氏菌AC蛋白相似性最高。本试验结果为进一步研究大肠杆菌AC蛋白的功能及其作为大肠杆菌疫苗候选抗原奠定了基础。; 操义恒贾开文党士荣胡亚辉王巧梅俞杰郭云霞周霞黄新钟发钢韩猛立吴桐忠张倩; 关键词：分子特征抗原性遗传进化

非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析: 2024年; 非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AHSV亚单位疫苗的组成成分具有一定应用前景。本试验实现了AHSV NS1蛋白在昆虫细胞中成功表达并验证其具有良好的抗原性,这为进一步研究AHSV NS1蛋白的生物学功能和亚单位疫苗开发奠定了基础。; 户鑫兵王轩莹宋昱庆田占成关贵全苟惠天罗建勋殷宏独军政; 关键词：非洲马瘟病毒抗原性

非洲猪瘟病毒CD2v蛋白胞内域与胞外域的原核表达及其抗原性分析被引量：1: 2024年; 【目的】应用大肠杆菌表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白胞外域(N-端,CD2v-N)与胞内域(C-端,CD2v-C)并分析两者的抗原性,为ASFV检测方法的研发提供试验依据和指导。【方法】构建CD2v-N和CD2v-C的重组原核表达质粒,在体外表达并纯化CD2v-N和CD2v-C蛋白,通过Western blotting对表达蛋白进行鉴定;用表达的CD2v-N和CD2v-C蛋白分别肌内接种免疫新西兰大白兔,共免疫3次,每次间隔2周;每次免疫后14 d,应用ELISA方法测定CD2v-N或CD2v-C的特异性抗体水平;用纯化后的CD2V-N和CD2v-C蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法检测95份ASFV感染猪的血清CD2v-N或CD2v-C特异性抗体,比较CD2v-N和CD2v-C在猪体内诱导的免疫反应水平。【结果】重组蛋白CD2v-N和CD2v-C分别以包涵体和可溶性形式表达,分子质量分别为22.9和34.0 ku,均能与猪抗ASFV血清特异性结合;用CD2v-N蛋白首免家兔后14 d,血清中未检测到特异性抗体,而在CD2v-C首免的家兔血清中检测到了高滴度的特异性抗体;三免后14 d,CD2v-N和CD2v-C蛋白免疫家兔的血清特异性抗体效价分别为1∶125000和1∶107;ELISA检测结果显示,ASFV感染猪的血清中CD2v-C特异性抗体水平显著高于CD2v-N(P<0.05)。【结论】本研究表达了ASFV CD2v蛋白胞内域和胞外域,前者的抗原性比后者高,CD2v胞内域作为ASFV免疫学检测技术研究与开发的靶标更具优势。该研究结果对ASFV检测方法的研究与开发具有重要指导意义。; 李艳蕊任静崔锦蔷袁晨王云霄马亚娟刘志昌李永社宋勤叶; 关键词：抗原性

华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段原核表达及其抗原性分析: 2024年; 目的通过克隆和表达获得华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段重组蛋白并分析其抗原性。方法以pET-28a-CsCP1-3重组质粒为模板进行目的片段CsCP1a-3a PCR扩增,构建pET28a-CsCP1a-3a表达载体,并转化至BL21(DE3)大肠埃希菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析;表达产物经变性、纯化及复性,与华支睾吸虫感染大鼠血清行Western blot分析。结果成功构建pET28a-CsCP1a-3a重组质粒;SDS-PAGE分析显示,重组蛋白CsCP1a-3a以包涵体形式表达;重组蛋白CsCP1a-3a可被华支睾吸虫感染后第4、5周大鼠血清识别。结论重组蛋白CsCP1a-3a具有较好抗原性,可作为华支睾吸虫感染诊断候选分子。; 韦帅李晓芹赖雅诗张立林卢婷邓佩超石云良李艳文; 关键词：华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶重组蛋白抗原性

2023年江苏常州地区H9N2亚型禽流感病毒遗传演化与抗原性分析: 2024年; 试验旨在调查H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在江苏省常州市的流行情况。2023年3—12月,在常州市所有辖区的交易平台、散养户、活禽市场、屠宰场等7种场所类型的147个采样场点开展H9N2亚型AIV流行病学调查,试验采集鸡、鸭、鹅、鸽等咽拭子、组织样品以及环境拭子共计1970份,进行AIV分离及其流行病学特征分析,并对分离的H9N2亚型AIV进行遗传演化、关键氨基酸与糖基化位点和抗原性分析。结果显示:共鉴定出73株H9N2亚型AIV,平均分离率为3.70%;4月和5月分离率较高,分别为7.07%和8.00%;分离地点中活禽市场和交易平台的分离率最高;H9N2亚型AIV在鸡、鸭、鸽、野鸟粪便和环境中均有分离,在环境和鸡中的分离率最高,分别为6.90%和4.15%;分离的H9N2亚型AIV属于欧亚谱系9.1分支中Group2群,与2021—2023年多个地区人感染H9N2亚型AIV亲缘关系较近;与参考株序列相比,H9N2亚型AIV分离株HA蛋白的130-loop、150-loop及190-helix存在明显氨基酸多态性,但没有发现新的糖基化位点;H9N2亚型AIV分离株均属于当前优势流行的抗原群,尚未发生明显抗原漂移。综上所述,江苏常州地区H9N2亚型AIV流行的热点场所是活禽市场和交易平台,提示环境消毒是控制病毒传播和污染的关键手段;H9N2亚型AIV可能在野生禽类中流行,须减少家禽与野禽接触;并且H9N2亚型AIV分离株HA蛋白受体结构域变异可能对人间感染造成持续威胁,值得关注。; 李玉冬张海涛罗燕周勇董金泽陈洪壮束思成陈雪张双玉刘晓妹杨亚军李荣杰夏福芳蒲娟罗坚强; 关键词：H9N2亚型禽流感活禽市场抗原性

鹅星状病毒辽宁株棘突蛋白优势抗原表位预测及抗原性分析: 周慧

牛乳腺炎致病性粪肠球菌esp表面蛋白抗原性分析及单克隆抗体胶体金标记免疫层析试剂盒研究: 奶牛乳腺炎是目前全球奶业最常见、最流行的疾病之一。它在全国各地都有不同程度的发生和蔓延,给农业造成了严重的经济损失,尤其是在气候寒冷干燥的内蒙古地区,其发病率更高。近年来,粪肠球菌已成为导致奶牛乳腺炎的主要病原体。伴随着...; 石竞楠; 关键词：牛乳腺炎粪肠球菌 ESP 单克隆抗体

中国南方地区H9N2亚型AIV遗传进化与抗原性分析及动物发病模型的建立: H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV),已在世界范围内的家禽群中广泛流行,在我国H9N2 AIV流行了近30年,因其潜在威胁性不断地困扰着养殖业而受到越来越多的关注。早在1998年我...; 曾庆航; 关键词：H9N2亚型AIV 遗传进化分析抗原性分析

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