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航天诱变向日葵长花瓣突变体(lpm)的抑制性差减杂交(SSH)文库的构建及分析被引量：1: 2020年; 本研究以航天诱变向日葵长花瓣突变体(long petal mutant, lpm)为研究材料,采用抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)的方法,成功构建了其幼嫩花芽的SSH文库。从文库中随机挑选399个阳性克隆进行测序拼接获得309个Unique表达序列标签(expression sequence tags, EST)。在GenBank数据库进行相似性比对分析,共有121条EST与已知序列具有较高的相似性,占Unique EST的39.16%。通过对已知基因进行功能分析,推测向日葵花瓣的形态发育受到与细胞生长和分裂、及细胞过程相关的基因的调控。本研究成功构建了航天诱变向日葵lpm的SSH文库,研究结果将进一步研究lpm形成机制提供理论基础。; 苏周吴雨赵欢马西豹邹建杨军; 关键词：向日葵航天诱变 SSH文库

基于甾体皂苷的襄麦冬块根抑制性差减杂交文库的构建被引量：1: 2018年; 【目的】甾体皂苷是襄麦冬块根主要活性成分之一,为了能在分子水平上实现对相关基因的表达调控,从而使甾体皂苷含量的提高成为可能,筛选参与甾体皂苷合成的蛋白或酶就非常必要。【方法】本实验以襄麦冬始见期块根和采收期块根作为实验样品,构建了不同生育期襄麦冬块根抑制性差减杂交(SSH)文库。【结果】构建的始见期和采收期块根差减文库的外源片段,有效基因序列308条,长度主要分布在250~1000 bp左右,片段平均长度586.99 bp;文库样本序列注释上NR、SWISS-PROT、TREMBL、CDD、PFAM库的基因分别有65.26%、34.42%、63.96%、26.30%、14.94%;样本中分别有23和103个Unigene可注释上12个COG分类与19个KOG分类中;样本中有81个预测基因,可以注释到48种酶与映射到92个代谢通路上;样本基因功能在Biological Process分类中聚集于cellular process和metabiolic process,在Cellular Component主要聚集于cell、cell part和intracellular,在Molecular Function分类中主要聚集于catalytic activity,binding和transferase activity。【结论】本实验成功构建了基于甾体皂苷的襄麦冬块根抑制性差减杂交文库,筛选出一批差异表达目的基因。; 余海忠王海燕赵慧君孙永林; 关键词：甾体皂苷抑制性差减杂交 EST序列分析

应用抑制性差减杂交技术研究枣缩果病病程相关基因: 2017年; 【目的】了解细交链孢菌侵染枣果实过程的差异表达基因。【方法】以白熟期‘蜂蜜罐’枣的果实为材料,人工接种细交链孢菌,分别在接种0.5、1、2、3和4 d后取样,通过抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了病原菌诱导的差异表达的c DNA消减文库。【结果】PCR鉴定随机挑取的阳性克隆,显示插入片段大小为200~900 bp。随机挑选200个阳性克隆进行测序,利用BLASTx在Gen Bank Nr数据库进行序列比对分析,共获得118个Unigenes。对这些ESTs进行功能分类发现细交链孢菌侵染下诱导表达基因涉及植物细胞内的多种代谢和应答过程,其中包括抗病/防御类、信号传导途径类、新陈代谢类、蛋白质合成和加工类及细胞结构的组成等,尤其以抗病/防御类基因所占比例最大(27.17%)。【结论】通过SSH研究了缩果病病原侵染果实过程的差异表达基因,鉴定到一些与枣缩果病相关的基因,为进一步研究相关基因及今后筛选防治枣缩果病提供理论基础。; 焦小利杨卉芯宋晓斌; 关键词：枣缩果病表达序列标签

抑制性差减杂交技术(SSH)及其应用研究进展被引量：3: 2016年; 抑制性差减杂交技术是一种差异性基因克隆的新技术,它对研究细胞生殖、发育、分化、衰老及死亡等生命过程中有关基因的差异表达及相关基因的分子克隆提供了有力的技术工具。简要概述了抑制性差减杂交技术的基本原理、优越性、缺陷及其在相关基因克隆方面的应用研究进展。; 梅冰陆翔窦法楷汪慧莲李显秋王永乔; 关键词：基因克隆抑制性差减杂交

抑制性差减杂交技术分离白血病多药耐药基因被引量：1: 2016年; 目的分离及鉴定与白血病多药耐药性相关的差异表达基因。方法采用抑制性差减杂交(SSH)技术分离非耐药细胞株K562与耐药细胞株K562/DOX差异表达基因。提取总RNA,逆转录合成cDNA,经限制性内切酶RsaⅠ酶切后,分别与不同的接头(adopter1和adopter2R)连接;连接产物插入pMD19-T载体后转入大肠埃希菌中,构建cDNA差减文库;挑取阳性克隆提取质粒进行测序及同源序列分析,确定差异表达基因。结果筛选获得220个差异表达基因,包括血红蛋白、核糖体和线粒体等相关基因,以及热休克因子结合蛋白(HSPB1)基因等其他基因。结论采用SSH技术及分子克隆技术可构建耐药及非耐药肿瘤细胞株差异表达基因的差减cDNA文库,能够为进一步筛选、克隆肿瘤细胞多药耐药性相关差异表达基因奠定基础。; 王楠潘喆袁宏; 关键词：白血病多药耐药抑制性差减杂交差异表达基因

应用抑制性差减杂交筛选鸭疫里默氏杆菌强弱菌株基因组的差异片段被引量：1: 2015年; 为了分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)强毒菌株HXb2和弱毒菌株NJ-1基因组之间的差异基因,以HXb2株基因组为待测菌株,以NJ-1株基因组为驱动菌株,构建了两株细菌基因组间的抑制性差减文库。经过dot-blot杂交和PCR验证,共鉴定到34个强弱毒株基因组差异片段。测定的序列经BLAST、DNAStar和PSORTb分析,结果表明有2个片段所在基因编码的蛋白为外膜蛋白,有2个片段所在基因编码的蛋白为胞质膜蛋白如磷酸盐转运蛋白,11个片段所在基因编码的蛋白为胞内蛋白如丙氨酸脱氢酶、β-内酰胺酶及一些假定蛋白等,有19个片段所在基因编码的蛋白(大部分为假定蛋白)定位未知。这些差异基因编码的蛋白可能与鸭疫里默氏杆菌的毒力及HXb2株特异蛋白等有关。本研究为下一步鉴定新的毒力基因及其他特异蛋白的功能奠定了基础。; 俞慧邢林林祁晶晶倪欣涛姜盼孙冰清崔俊生欧长灿于圣青胡青海; 关键词：鸭疫里默氏杆菌抑制性差减杂交

抑制性差减杂交技术筛选HPS潜在毒力基因及鉴别HPS潜在毒力菌株二重PCR方法的建立: 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)可引起猪浆液纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎及脑膜脑炎等症状。副猪嗜血杆菌病在全世界范围内广泛流行，成为威胁养猪业的重要疫病之一。本试验在2011年1...; 郑礼洲; 关键词：副猪嗜血杆菌血清分型抑制性差减杂交二重PCR; 文献传递

黑斑病菌诱导的紫薯抑制性差减杂交文库构建及ESTs分析被引量：1: 2014年; 本研究以紫薯1号为材料,运用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建了经黑斑病菌诱导12、24、36、48、60 h后的甘薯块根混合SSH cDNA文库。随机挑取103个cDNA克隆进行5'端测序,共获得87个非重复序列,其中包括29个重叠群,58个独立的ESTs,利用tblastx对87个序列在NCBI数据库中进行同源性比对。结果表明,在编号为14的EST中找到了"蔷薇"黑斑抗性muRdr1基因位点,基因全序列包括muRdr1A、muRdr1B、muRdr1C、muRdr1D、muRdr1E、muRdr1F、muRdr1G、muRdr1H、muRdr1I共9个基因。另外有2类基因的含量较高,一类是紫薯组织特异性相关基因,另一类是紫薯受干旱胁迫的抗逆相关基因。构建cDNA文库,应用EST技术并结合生物信息学技术,对紫薯抗病相关基因的表达分析,从基因水平上来研究紫薯抗病机制,为今后的紫薯抗病遗传育种及抗病机理奠定论基础。; 曾绍华张聪李明屈会娟张敏阎文昭蒲志刚; 关键词：紫薯表达序列标签

应用抑制性差减杂交技术筛选锦橙CTV应答基因被引量：1: 2013年; 【目的】探讨易感柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus,CTV)品种锦橙CTV应答分子机理,筛选和分析CTV应答基因。【方法】以嫁接CTV强毒株TRL514的锦橙阳性材料叶片为试验方(Tester),用嫁接无毒枝条的CTV阴性锦橙叶片为驱动方(Driver),构建CTV侵染的锦橙的正向差减文库。【结果】随机挑选850个阳性克隆测序,其中742条测序成功,去除载体片段和接头序列后得到有效EST 692条。将所有EST序列对应到柑橘的预测基因组转录物,共涉及137个柑橘基因。应用BLAST2GO对这些特异性表达的基因进行功能归类和KEGG分析。结果表明,受CTV侵染的影响,锦橙能量代谢相关基因上调明显,与光合器官碳固定、氮代谢、淀粉和蔗糖代谢等途径相关的EST出现频率较高。另外,与抗逆防御以及苯基丙氨酸合成、类苯基丙烷代谢、类胡萝卜素合成等与植物防御素类物质合成密切相关的代谢途径相关基因较多。【结论】由于CTV的侵染,CTV易感品种锦橙基础代谢改变明显,须通过增强能量代谢和提高自身防御能力来维持自身生长和发育。; 程春振曾继吾贝学军吴波阳佳位张永艳姜波朱世平闫树堂钟云钟广炎; 关键词：柑橘差异表达基因 CTV

黑斑病菌诱导的紫薯抑制性差减杂交文库构建及ESTs分析: 甘薯是世界上重要的粮食、饲料、工业原料和生物能源用作物,中国是世界上种植甘薯量最大的国家。甘薯营养丰富,其块根中不仅含有大量淀粉类物质、可溶性糖、多种氨基酸和维生素外,还含有脂肪、蛋白质、食物纤维以及铁、钙等矿物质,可与...; 曾绍华; 关键词：紫薯表达序列标签; 文献传递

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