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Cd36基因过表达的山羊乳腺上皮细胞的构建方法及应用
本发明提供Cd36基因过表达的山羊乳腺上皮细胞的构建方法及应用,靶向山羊乳腺上皮细胞Cd36基因的gRNA,构建Cd36基因过表达山羊乳腺上皮细胞。该方法包括:利用基因编辑技术,将编码Cd36基因的启动子替换为内源性强表...
邢怡明白伊丽娜
山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体不同提取方法的比较
2024年
为了比较不同方法提取山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体的效果,试验采用超速离心法和试剂盒法提取细胞上清液中的外泌体,利用透射电子显微镜观察外泌体形态,以纳米流式仪检测外泌体浓度和粒径,Western-blot法检测外泌体表面标志物蛋白并通过Image J软件分析其相对表达量。结果表明:超速离心法和试剂盒法提取的外泌体均具有圆盘状的双层膜结构,且轮廓清晰,但是试剂盒法提取的外泌体中存在其他蛋白质颗粒。超速离心法提取获得的外泌体较为分散,外泌体粒径集中在55~60 nm之间;试剂盒法提取获得的外泌体大小更为均一,外泌体粒径集中在58 nm左右。两种方法提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白均呈阳性。试剂盒法提取的外泌体浓度极显著高于超速离心法(P<0.01),提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白相对表达量也极显著高于超速离心法(P<0.01)。说明超速离心法和试剂盒法均可以从山羊乳腺上皮细胞重编程过程的细胞上清液中提取出外泌体,区别在于超速离心法提取的外泌体纯度更高,试剂盒法提取的外泌体浓度更高。
魏梦珍张丹丹汤文魁刘权辉王国栋黄奔
关键词:细胞重编程外泌体超速离心法
一种用于奶山羊乳腺类器官培养的培养基及其应用、构建乳腺炎体外模型的方法
本发明涉及类器官培养领域,特别是涉及一种用于奶山羊乳腺类器官培养的培养基及其应用、构建乳腺炎体外模型的方法。本发明将FBS、EGF、b FGF、ITS细胞培养添加物、B‑27添加剂、青链霉素、L‑谷氨酰胺、Noggin、...
刘旭张倩郑小曼刘程媛王凡
一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体
本发明涉及基因表达与调控技术领域,公开了一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体,首先利用NCBI检索奶山羊四种酪蛋白基因序列,检测奶山羊四种酪蛋白转录结合因子的潜在信号。挖掘及鉴定出奶山羊泌乳期特异性增强酪蛋...
刘军米晓钰张涌罗艳祝振亮赵江林薛姣雄高丹丹
山羊乳腺组织和乳脂球全转录谱的比较分析
胡馨月
氨基酸与能量底物对泌乳奶山羊乳腺原代上皮细胞酪蛋白合成的影响
赵乐
chi-miR-345-3p靶向调控CASP9和TGFβ3对奶山羊乳腺上皮细胞生长的影响
郭燕飞
基于WOS的奶山羊乳腺炎研究态势分析
2023年
乳腺炎是阻碍畜牧业发展的难题之一,也是畜牧业领域的研究热点。该文以1943-2022年Web of Science(WOS)信息平台上关于奶山羊乳腺炎领域的文献为研究对象,使用文献计量分析方法,对奶山羊乳腺炎研究的发文情况、研究热点及前沿进行分析。结果表明:奶山羊乳腺炎文献数量的增长总体呈上升趋势;中国在奶山羊乳腺炎方面的研究起步较晚,但发文量增长趋势较好;奶山羊乳腺炎文献研究领域主要涉及农业、兽医科学、传染性疾病、食品科学与技术以及动物学等;研究的重要关键词除有“乳产量”、“乳腺”、“流行”等常见词汇外,还有“体细胞数”、“蛋白质”、“基因”、“金黄色葡萄球菌”等细胞分子领域词汇。在今后的乳腺炎研究过程中,可以通过不断加强各区域间的合作以及各专业知识间的结合,将乳腺炎的病因及防治措施进一步细化,并重视对乳腺炎预防工作的研究,以提高乳腺炎的研究效率。
潘晔君米芳王乾蓝贤勇宋晓越
关键词:奶山羊乳腺炎文献计量分析金黄色葡萄球菌体细胞数
一种分泌型的崂山奶山羊乳腺上皮细胞系的构建方法
本发明公开了一种分泌型的崂山奶山羊乳腺上皮细胞系的构建方法,本发明将含有目的基因SV40LT外源性表达载体转染到奶山羊乳腺上皮细胞,构建转基因的奶山羊乳腺上皮细胞系;荧光显微镜观察标记基因copGFP的表达情况,并经Pu...
苏峰张鸿焱葛利江姜运良李伯玉刘营
二十二碳六烯酸对奶山羊乳腺上皮细胞转录调控机理研究
2023年
本试验旨在研究二十二碳六烯酸(DHA)对奶山羊乳腺上皮细胞(GMECs)转录调控机理。试验使用不同浓度的DHA(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000和100.000μmol/L)对GMECs进行处理,并测定细胞活力,然后利用转录组测序(RNA-Seq)技术对DHA作用的GMECs进行测序,获得并分析相关基因表达。结果表明:1)与空白对照组(无DHA处理)相比,低浓度DHA(≤25.000μmol/L)对各时间点GMECs细胞活力无明显抑制作用;当DHA浓度高于50.000μmol/L时,GMECs细胞活力出现明显下降。在不同时间点,24 h时各浓度DHA处理GMECs细胞活力高于其他时间点。因此,选择处理时间为24 h、DHA浓度为25.000μmol/L用于后续试验。2)构建DHA在GMECs中作用的RNA文库,获得的碱基质量值≥20的碱基所占百分比(Q20)和碱基质量值≥30的碱基所占百分比(Q30)均在96%以上,鸟嘌呤和胞嘧啶(CG)占比为53%,各个组的比对效率为98.18%~98.43%,表明转录组信息质量较高。3)以|log10[差异倍数(FC)]|>1且P<0.05为筛选标准,共筛选出236个显著差异表达基因(DEGs),其中108个基因表达上调,128个基因表达下调。4)基因本体论(GO)富集分析发现,DEGs主要富集在铁离子结合、聚合细胞骨架纤维、中间丝状体细胞骨架和中间丝状体中,并参与Rho家族鸟苷三磷酸酶(Rho GTPases)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和Hippo等信号通路的信号转导。5)京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析发现,DEGs显著富集到视黄醇代谢、谷胱甘肽代谢、亚油酸代谢、化学致癌、药物代谢-细胞色素P450和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路。由此可知,DHA在GMECs的免疫、细胞骨架构建、抗炎、抗癌及代谢等相关通路中具有明显作用,其中亚油酸代谢、PPAR信号通路能够在脂代谢方面发挥作用。
雷琼郭宇康张佳惠张富刘维巍刘庆华
关键词:二十二碳六烯酸奶山羊乳腺上皮细胞转录组测序

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张涌
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作品数:662被引量:877H指数:15
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