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鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒双重 RT-PCR 检测方法的建立及应用 2024年 双重 RT-PCR 检测方法,该方法具有较高的特异性,在903 bp(GAstV)和226 bp(NDRV)可检测到特异性条带,最低灵敏度为1.0×10^(3)copies/μL。在鲁中、鲁西北及鲁南地区不同规模的养鹅场中随机采取320份样本,GAstV的阳性率为21.56%(69/320),NDRV的阳性率为3.44%(11/320),混合感染阳性率为2.81%(9/320),单一RT-PCR 结果与双重 RT-PCR 方法一致。该方法的建立为快速诊断GAstV和NDRV提供了可靠的手段。关键词：双重RT-PCR 禽流感病毒H10N3亚型一步法双重 RT-PCR 检测方法的建立 被引量：1 2023年 双重 RT-PCR 检测方法。结果显示,该方法可分别扩增出407 bp和602 bp禽流感病毒H10基因和N3基因的特异性条带,且不与H1N1、H3N2、H6N6、H7N9、H9N2亚型禽流感病毒以及NDV、IBV、IBDV、DTMUV发生交叉反应。该方法灵敏度高,最低检出限为900 pg。在对36份已知的临床样品的检测中,H10N3亚型禽流感病毒阳性率为2.78%,与禽流感H10Nx基因型、Hx N3基因型一步法RT-PCR 检测方法以及病毒分离鉴定结果一致,符合率均为100%。上述结果表明,本研究建立的一步法双重 RT-PCR 方法可以在一次PCR 反应中检出H10与N3亚型禽流感病毒混合感染或者单一感染样品,为兽医工作者开展H10N3、H10Nx和Hx N3亚型禽流感的临床诊断和流行病学监测提供了一种简单、有效的分子生物学快速检测方法。关键词：禽流感病毒 双重RT-PCR 鸭甲肝病毒1型和3型一步法双重 RT-PCR 鉴别检测方法的建立及其初步应用 2023年 双重 RT-PCR 反应条件的优化,建立了鉴别DHAV-1和DHAV-3的一步法双重 RT-PCR 方法,并应用该方法对2016—2021年山东地区采集的58份临床病料样品进行病原学检测分析。结果显示:该方法能够分别扩增出DHAV-1的230 bp和DHAV-3的502 bp的特异性条带,而DTMUV、NDV、AIV-H9、FADV、DEV、GPV均无任何扩增条带。该方法最低可检测到0.62 ng DHAV-1 RNA和0.59 ng DHAV-3 RNA。该方法与病毒分离方法的符合率达100%。该方法检测58份临床病料样品,共检测出阳性样品27份,阳性率达46.55%,其中2016—2021年DHAV-1阳性率分别为33.33%,25.00%,22.22%,12.50%,11.11%,0.00%;DHAV-3阳性率分别为8.33%,16.67%,22.22%,37.50%,33.33%,37.50%。表明建立的DHAV-1和DHAV-3一步法双重 RT-PCR 鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性;同时发现山东地区DAHV的优势流行毒株已由DHAV-1转变为DHAV-3。关键词：病原学 流行毒株 贝类中沙门氏菌、阪崎肠杆菌双重 RT-PCR 检测方法研究 2023年 双重 实时荧光PCR 方法,能同时快速、灵敏、特异地检测贝类中沙门氏菌、阪崎肠杆菌的双重 实时荧光PCR 体系。本研究以水产品中贝类为目标,根据特定基因序列,设计特异性扩增引物和TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和条件,每种引物探针体系均可以特异性检测目标致病菌类型。2套引物探针体系组合可同时检测沙门氏菌、阪崎肠杆菌。双重 RT-PCR 方法的最低检测限可低至0.002 ng或0.02 ng基因组/反应,变异系数均小于2%。利用建立的双重 RT-PCR 方法检测14份贝类产品样本,样品实测结果与国家标准方法的检测结果一致,符合率为100%。结果表明,本研究建立的双重 RT-PCR 方法具有特异性、敏感性高、重复性好等优点,为贝类产品中沙门氏菌、阪崎肠杆菌的快速检测提供了新的技术方法。关键词：贝类 沙门氏菌 阪崎肠杆菌 一种冻干型甲型和乙型流感病毒的双重 RT-PCR 检测试剂盒 双重 RT ‑PCR 检测试剂盒，包括以下组分：RT ‑PCR 缓冲液、冻干缓冲液、DNA聚合酶、RNase抑制剂、甲型流感病毒RT ‑PCR 的引物和探针、乙型流感病毒RT ‑PCR 的引物和探针...一种同时检测罗湖病毒和病毒性神经坏死病毒的双重 RT-PCR 的引物组，试剂盒和方法 双重 RT ‑PCR 的引物组，试剂盒和方法。所述引物组序列如SEQ ID NO:1和2，SEQ ID NO:3和4所示。运用该引物组可以同时检测两种病毒，缩短时间，加快检...猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重 RT-PCR 检测方法的建立 2022年 双重 RT-PCR 检测方法。【方法】首先从退火温度与引物浓度先对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的单项RT-PCR 方法的条件分别进行筛选与优化,然后对其双重 RT-PCR 方法的条件进行筛选与优化,并进行特异性与敏感性检测,最后初步应用于临床样品检测。【结果】建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重 RT-PCR 检测方法不能检出猪流行性腹泻病毒和猪瘟病毒等当前流行较广的其他猪源RNA病毒,对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的检测灵敏度分别是100、200 copies/μL。此方法对2020—2021年8个猪场的220份血清样品的检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的个体阳性率分别为7.73%和43.64%,与单项RT-PCR 方法检测结果完全一致。【结论】建立了一种高敏感性的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重 RT-PCR 检测方法。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 双重RT-PCR 2种鹅星状病毒一步法双重 RT-PCR 检测方法的建立与应用 被引量：1 2022年 双重 RT-PCR 检测方法。该方法可同时扩增出新型鹅星状病毒658 bp和鹅星状病毒变异株381 bp的特异性条带,对坦布苏病毒、鹅细小病毒、鹅副黏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、大肠杆菌和沙门菌的扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。对新型鹅星状病毒和鹅星状病毒变异株重组质粒的最低检测量分别是1μl 1.71×103拷贝和1μl 1.70×103拷贝,敏感性良好,并且具有良好的重复性。应用该方法对临床采集的雏鹅泄殖腔拭子进行检测,结果显示,124份样品中新型鹅星状病毒阳性率为45.16%,鹅星状病毒变异株阳性率为28.23%,2种鹅星状病毒均为阳性的占11.29%,与单一RT-PCR 方法检测结果符合率为100.00%。本研究建立的一步法双重 RT-PCR 检测方法快速简便,特异性强、灵敏度高,可用于临床样品的鉴别诊断,该方法的建立对2种鹅星状病毒病的流行病学调查和有效防控以及混合感染的致病性研究具有重要意义。鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒双重 RT-PCR 检测方法的建立及应用 关键词：双重RT-PCR 鸭丙型肝炎病毒和鸭新型微核糖核酸病毒双重 RT-PCR 检测引物 双重 RT ‑PCR 检测引物，所述引物如下：针对鸭丙型肝炎病毒的特异性引物序列如SEQ.ID.No.1、SEQ.ID.No.2所示，目的片段大小为502bp；针对鸭新型微核糖...文献传递
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