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昆虫细胞原核细胞表达系统制备基孔肯雅病毒主要抗原
[目的]基孔肯雅热(Chikungunya Fever,CHIKF)是以伊蚊作为传播媒介,由基孔肯雅病毒(Chikungunya Virus,CHIKV)感染引起的急性传染病,临床症状主要表现为发热、关节疼痛、皮疹。病死...
李会
关键词:原核表达系统诊断试剂
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一种原核细胞表达类病毒颗粒的纯化方法
本发明涉及一种大肠杆菌表达的类病毒颗粒的纯化方法,其特征在于,所述纯化方法包括沉淀步骤、第一层析步骤、第二层析步骤、浓缩步骤和第三层析步骤,其中所述沉淀步骤包括硫酸铵沉淀步骤,所述第一层析步骤包括分子筛层析步骤,所述第二...
宋翠灵李建强孙洪林顾月周童徐振兴黄红颖程晓晓徐晓威
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抗乙肝病毒多肽药物C20-MTS的原核细胞表达、纯化及其体外功能研究
目的:乙型肝炎是一种严重威胁人类健康和公共卫生的全球性传染病。虽然乙肝的防治已取得了很大进步,但目前仍缺乏疗效好、毒副作用低、价格便宜的药物。因此,寻找新的抗病毒作用靶位,研制与现有药物不同作用机理的新药,具有重要的临床...
王婧
关键词:病毒抑制生化药理
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一种原核细胞表达类病毒颗粒的纯化方法
本发明涉及一种大肠杆菌表达的类病毒颗粒的纯化方法,其特征在于,所述纯化方法包括沉淀步骤、第一层析步骤、第二层析步骤、浓缩步骤和第三层析步骤,其中所述沉淀步骤包括硫酸铵沉淀步骤,所述第一层析步骤包括分子筛层析步骤,所述第二...
宋翠灵李建强孙洪林顾月周童徐振兴黄红颖程晓晓徐晓威
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白念珠菌β-葡萄糖苷酶2的原核细胞表达、鉴定及免疫反应性被引量:1
2014年
目的构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2(BGL2)的原核细胞表达质粒,诱导其表达后加以鉴定,并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因,插入原核细胞表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌(E.coli)BL21,经IPTG诱导表达后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测蛋白质的表达情况,梯度透析法对包涵体蛋白质复性,用抗His标签单克隆抗体鉴定。用临床侵袭性念珠菌病(IC)患者血清判定重组蛋白质的免疫反应性。结果成功构建原核细胞表达质粒pET30a-bgl2,诱导后的重组蛋白质以包涵体形式表达,经梯度透析复性成功。重组蛋白质能被抗His标签抗体识别,并与IC患者血清有良好的反应性。结论用原核细胞表达体系成功表达了白念珠菌BGL2,该蛋白质具有良好的免疫反应性,为进一步研究其在IC诊断中的作用打下基础。
贺政新冉向阳陈晶王宪灵侯天文
关键词:白念珠菌原核细胞表达侵袭性念珠菌病
人PAMM蛋白的原核细胞表达、纯化及其体外抗炎作用研究
炎症作为一种常见的疾病严重影响着人们的身体健康。研究发现,炎症与动脉硬化、癌症、糖尿病、肥胖等有密切关系。前期相关的研究表明,人PAMM蛋白在HEK293和RAW264.7细胞中的高表达可明显增加细胞内GSH/GSSG比...
付志超
关键词:炎症反应抗炎作用
獭兔生长激素基因克隆及原核细胞表达的初步研究
獭兔原产于法国,又名力克斯兔(Rex rabbit)是一种皮肉兼用兔,由于獭兔皮毛酷似水貂而得名。獭兔体型明显小于肉兔体型,所以獭兔皮张面积将小于肉兔皮张面积。通过改变獭兔生长发育性能期望提高獭兔体型,从而在不改变獭兔皮...
孙伟男
关键词:獭兔生长激素基因克隆技术原核细胞表达
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Daxx-C626-740原核细胞表达载体的构建与诱导表达
2013年
目的为了研制Daxx-C抗体并观察其在宫颈癌细胞中的应用效果,构建原核表达载体pET28a/DM626-740,将其在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物,鉴定其抗原性。方法用PRIMER5.0软件设计Daxx-C基因片段(氨基酸626-740)特异性引物,引入BamHI和SalI酶切位点,PCR扩增目的基因。将PCR产物连入载体pMD18-T,构建pMD18-T/DM626-740;然后,将BamHI和SalI酶切产物连入载体pET28a,经酶切鉴定及DNA序列分析后,构建原核表达载体pET28a/DM626-740。将其转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,利用Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化表达产物,Western-blot检测表达物与纯产物。结果双酶切和DNA测序结果显示,PCR正确扩增了Daxx-C基因片段并成功连入载体pET28a,构建了原核表达载体pET28a/DM626-740;该质粒在E.coli中诱导表达分子量约19kDa目的蛋白,且该蛋白能被抗Daxx抗体检出。结论构建的原核表达载体pET28a/DM626-740能在E.coli中表达目的的蛋白6His-DM626-740,并具有良好的抗原性。
李耀林周艺何爱桃唐双阳王蓉万艳平
关键词:DAXX纯化抗原性
登革病毒1型E蛋白的原核细胞表达及多克隆抗体的制备被引量:1
2013年
目的构建登革病毒1型(DENV-1)E蛋白的原核细胞表达载体并进行原核细胞表达,并制备其多克隆抗体。方法利用聚合酶链反应(PCR)扩增DENV-1E蛋白序列,经酶切后将其插入原核细胞表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-D1-E。重组质粒转化E.Coli Rosetta(DE3)感受态细胞,目的蛋白经异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达情况,并用纯化后的表达蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗血清,用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性。结果成功构建了pET-32-D1-E原核细胞表达重组质粒,DENV-1E蛋白获得高效表达;纯化后的重组蛋白免疫家兔获得的特异性抗血清效价为1∶25 600,Western blot证实其特异性良好。结论成功构建了DENV-1E蛋白的原核细胞表达载体,并制备了可用于DENV快速检测的高效多克隆抗体。
汪伟丁显平杨会强李竹石谭帅赵宇刘莉娜谭昌耀曾献武
关键词:登革病毒原核细胞
白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定被引量:6
2012年
目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定。结果成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。结论成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。
孔倩倩廖红李芳秋马春芳史利宁胡毓安
关键词:白念珠菌基因克隆原核细胞表达

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曹丽艳
作品数:24被引量:48H指数:5
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
研究主题:弓形虫 刚地弓形虫 表达质粒 BHK-21细胞 基因真核
张德林
作品数:110被引量:330H指数:11
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:弓形虫 弓形虫病 刚地弓形虫 旋毛虫 弓形体
王艳华
作品数:104被引量:224H指数:8
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
研究主题:弓形虫 细胞弱毒疫苗 弓形虫病 睾丸支持细胞 增殖
芦赟
作品数:16被引量:23H指数:3
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
研究主题:弓形虫 刚地弓形虫 表达质粒 BHK-21细胞 基因真核
李前
作品数:67被引量:107H指数:6
供职机构:军事医学科学院毒物药物研究所
研究主题:表皮生长因子 转导 融合蛋白 乙酰胆碱酯酶 核酸分子